[发明专利]一种基于短链核酸探针和双链特异性核酸内切酶的高特异性microRNA荧光检测方法有效
申请号: | 201710425770.4 | 申请日: | 2017-06-08 |
公开(公告)号: | CN107267604B | 公开(公告)日: | 2021-02-26 |
发明(设计)人: | 戴宗;马颖君;邹小勇 | 申请(专利权)人: | 中山大学 |
主分类号: | C12Q1/6816 | 分类号: | C12Q1/6816 |
代理公司: | 广州嘉权专利商标事务所有限公司 44205 | 代理人: | 舒胜英;胡辉 |
地址: | 510275 广东省广*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | 本发明公开了一种基于短链核酸探针和双链特异性核酸内切酶的高特异性microRNA荧光检测方法。本发明通过使用短链DNA探针,结合DSN酶,在加速探针/miRNA杂交速率和杂交‑酶切循环速率的同时,提高了探针对杂交反应碱基错配的敏感性,实现人体温度下的miRNA高灵敏度、高特异性恒温检测;可敏感区分单碱基错配的同源相似miRNAs。本方法可在37℃下获得高效扩增反应,相比于其他基于DSN酶的扩增反应(温度需为55~60℃),更适合用于细胞等原位或活体检测。该扩增反应为恒温反应,无需精确的控温或温度循环装置,操作简单,成本低,更适合市场推广。 | ||
搜索关键词: | 一种 基于 核酸 探针 特异性 内切酶 microrna 荧光 检测 方法 | ||
【主权项】:
一种基于短链核酸探针和双链特异性核酸内切酶的microRNA荧光检测方法,其特征在于,包括以下步骤:1)将目标microRNA序列划分为两段,3'端段和5'端段,两段的碱基数均不低于8bp,设计探针P1使其能够检测3'端段或5'端段;2)用探针P1对待测样品进行双链特异性核酸内切酶介导的microRNA荧光检测,得荧光值F1,若与探针P1互补配对的序列仅存在目标microRNA中,根据检测所得荧光值F1计算microRNA含量,即为目标microRNA的含量;3)若与探针P1互补配对的序列还存在于其他非目标microRNA中,根据探针P1计算所得的microRNA含量记为C1;同时再设计特异性检测该非目标microRNA的探针P2,P2的碱基数不低于8bp且不高于12bp;4)用探针P2对待测样品进行双链特异性核酸内切酶介导的microRNA荧光检测,得荧光值F2,根据荧光值F2计算得microRNA含量C2,C1减去C2的差值即为目标microRNA的含量。
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