[发明专利]新型抗菌肽DLP4的制备方法

摘要

本发明提供新型抗菌肽DLP4的制备方法，利用基因工程技术，通过对编码抗菌肽DLP4基因的优化，实现其在毕赤酵母中的重组表达。本发明首次实现抗菌肽DLP4在毕赤酵母基因工程菌中的表达，经测定发酵纯化产物对金黄色葡萄球菌ATCC 25923，ATCC 43300和ATCC 6538以及猪链球菌CVCC 606具有显著抑菌活性，MIC介于0.031‑2μg/ml。采用本发明方法制备的抗菌肽DLP4可应用于抗菌药物、食品添加剂、化妆品、饲料添加剂等领域，具有广阔的应用价值和市场前景。

主权项

新型抗菌肽DLP4的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1)基因表达框的设计：对抗菌肽DLP4的编码基因进行酵母偏爱密码子优化，在优化后的基因序列的5’端添加XhoI酶切位点和Kex2切割位点，在3’端添加TAA和TAG终止子序列以及XbaI酶切位点，所得基因表达框的核苷酸序列如SEQ ID No:3所示；2)重组酵母表达载体的构建：将SEQ ID No:3所示的基因经XhoI和XbaI双酶切后，与经过同样双酶切的pPICZαA载体连接，得到的重组酵母表达载体pPICDLP4；3)重组酵母菌的制备：载体pPICDLP4经线性化后转化感受态毕赤酵母X‑33，筛选出高水平表达抗菌肽DLP4的重组酵母菌；4)抗菌肽DLP4的制备：对步骤3)中获得的重组酵母菌进行发酵培养，通过补加葡萄糖和甲醇诱导，获得发酵液，离心收集上清，上清经纯化后即得抗菌肽DLP4。