[发明专利]髓核细胞源性活性微载体的构建有效
| 申请号： | 201710432632.9 | 申请日： | 2017-06-09 |
| 公开（公告）号： | CN107308497B | 公开（公告）日： | 2019-11-26 |
| 发明（设计）人： | 周校澎;陶轶卿;李方财;陈其昕 | 申请（专利权）人： | 浙江大学 |
| 主分类号： | A61L27/36 | 分类号： | A61L27/36;A61L27/38;A61L27/50;A61L27/54 |
| 代理公司： | 33200 杭州求是专利事务所有限公司 | 代理人： | 赵杭丽<国际申请>=<国际公布>=<进入 |
| 地址： | 310058 浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明提供一种髓核细胞源性活性微载体构建方法，将大鼠髓核细胞扩增后利用离心法构建出髓核细胞微球，在特定环境中培养12天，使髓核细胞分泌足够的细胞外基质成分，通过联合使用脱细胞剂将细胞微球中原有的髓核细胞组分除去，从而获得一种由髓核细胞自身分泌的基质构成的髓核细胞源性活性微载体。本发明得到具有高效诱导干细胞成髓核细胞定向分化的载体材料；获得的细胞载体所含成分由髓核细胞自身合成，符合椎间盘原生态微环境；避免载体构建过程中所引入的化学成分对载体生物活性的破坏，不含其他高分子材料，避免载体降解产物对椎间盘环境的影响，能搭载干细胞且能通过注射进入生物体内，可用于负载干细胞从而进行退变椎间盘体内修复。 | ||
| 搜索关键词： | 细胞 活性 载体 构建 | ||
【主权项】：
1.一种髓核细胞源性活性微载体构建方法，其特征在于，具体构建方法如下：/n（1）髓核细胞微球制备/n取SD大鼠髓核细胞，使用F12培养基扩增至第3代，取4×10^5个髓核细胞使用1mL F12培养基重悬，并置于15mL离心管，通过离心富集法在1000rpm下离心5分钟，在F12培养基中静置24h，利用髓核细胞自卷曲能力获得髓核细胞微球；/n（2）髓核细胞微球基质合成/n更换髓核细胞微球的培养环境：在DMEM高糖培养基中添加10ng/mL的TGF-β3，10%胎牛血清，50nM维生素C，于37℃，5%CO2的环境中培养12天，每3天换一次液，促进髓核细胞微球中基质产生和沉积；/n（3）获得髓核细胞源性活性微载体/n首先，联合使用脱细胞剂2% Triton-100和50mM的SB-10对培养后的髓核细胞微球进行脱细胞处理，37℃恒温摇床中以100转/分钟的速率处理1小时，在脱去髓核细胞后利用720mU/mL脱氧核糖核酸酶和720mU/mL核糖核酸酶对残留核酸成分进行灭活，最后使用磷酸盐缓冲液在先前摇床环境下对获得的微载体清洗3次，每次5分钟，从而获得一种由髓核细胞自身分泌的基质构成的髓核细胞源性活性微载体。/n
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