[发明专利]一种诸葛菜胚状体和植株的培养方法

摘要

本发明公开了一种诸葛菜胚状体和植株的培养方法，包括以下步骤诸葛菜种植，小孢子培养和植株再生、移栽；在小孢子培养阶段中，热激培养时间和活性炭浓度对胚状体产量会造成影响，其中，活性炭的添加量与小孢子NLN‑13悬液的质量体积比(mg/mL)为14～34；热激培养条件具体为32～35℃暗培养1～7天。本发明可以快速获得数量较多的诸葛菜小孢子胚状体和遗传稳定的再生植株，有利于加快诸葛菜新品种培育的进程。

主权项

一种诸葛菜胚状体和植株的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：1)9月中下旬，将诸葛菜种子于大田播种育苗，将幼苗移栽到玻璃温室内土壤中，成活后每窝施复合肥5g，根据需要浇水；温室光照为自然光，温度不做特殊控制；开花后取样进行小孢子培养；2)小孢子培养：花期上午8～9点，从生长健康植株取4～5mm长花蕾，经5％氨替福民溶液消毒10～15min后用无菌水清洗；消毒花蕾置于培养皿中，加适量B5‑13培养液，其中，B5‑13培养液的pH5.8，含13％蔗糖，用注射器内筒研磨挤压出花粉，400目不锈钢筛网过滤，将花粉悬液转移到离心管中离心，弃上清液，再加入B5‑13培养液摇匀离心；如此重复离心3次后，用pH6.0的NLN‑13培养液按1蕾花粉/mL密度悬浮；将小孢子NLN‑13悬液混匀，分装于ф6cm培养皿，在每皿中添加活性炭储存液，封口膜封口后进行热激培养，然后转移到25℃下继续暗培养，肉眼可见胚状体时转入振荡培养箱中进行培养，得到子叶胚；3)植株再生、移栽：将振荡培养后的子叶胚转移到琼脂培养基上，在光照条件下培养；出芽后将芽切下继代保存和扩繁到每个花粉植株无性系具有3～5芽；移栽前1个月，将芽转移到生根培养基上生根；生根后的试管苗经炼苗1周后移栽到试验地，最初1周内用白色塑料膜遮蔽。