[发明专利]单色多重定量PCR

摘要

本文公开了用于用单一检测标记在单个反应孔中测定相比于第二靶核酸拷贝数的第一靶核酸拷贝数的方法和组合物。例如，本文公开了用于用单一检测标记在单个反应孔中通过单色多重定量PCR(MMQPCR)测定相比于第二靶核酸拷贝数的第一靶核酸拷贝数的方法和组合物。

主权项

一种用于测定第一靶核酸和第二靶核酸的拷贝数的方法，包括：a)将第一靶核酸和第一引物组并将第二靶核酸和第二引物组接触，并且加入单一检测标记以形成均一体系的反应混合物，其中所述第一引物组的引物之一被阻止引发所述第一靶核酸并且被阻止引发所述第一靶核酸的引物在其3’端包含错配碱基，其中所述第一靶核酸序列的拷贝数比所述第二靶核酸序列的拷贝数多；b)通过聚合酶链式反应用第一引物组扩增第一靶核酸以形成具有第一解链温度的第一扩增子，以及通过聚合酶链式反应用第二引物组扩增第二靶核酸以形成具有第二解链温度的第二扩增子，其中所述第二解链温度比所述第一解链温度高；c)在聚合酶链式反应期间，在第一信号采集温度测定所述检测标记的量，其中所述第一信号采集温度是低于所述第一解链温度；d)在聚合酶链式反应期间，在第二信号采集温度并测定所述检测标记的量，其中所述第二信号采集温度高于所述第一解链温度且低于所述第二解链温度；e)重复步骤(b)至(d)至少一次；以及f)测定所述第一靶核酸相比于所述第二靶核酸的相对拷贝数。