[发明专利]一种牙龈上皮模型及其体外构建方法

摘要

本发明公开一种牙龈上皮模型及其体外构建方法，其特征是包括以下方法步骤；步骤一、牙龈上皮细胞的原代培养及扩增，步骤二、牙龈上皮细胞液下接种培养，步骤三、牙龈上皮模型气液面的增殖分化培养本发明使用人源牙龈上皮细胞的使用，使模型结构及功能更接近正常人体牙龈上皮组织，能更加真实的反应检测指标；体外构建重复性佳，可实现产业化制备；气液面分段培养法，保证了细胞在不同阶段的不同营养需求，缩短了构建时间、降低生产成本；培养基中因子的添加，保证了模型的正常复层化，这种自身结构和细胞外微环境的影响可进一步提升模型的屏障功能，最终构建的体外牙龈上皮模型与人牙龈上皮组织具有高度相似的结构及功能。

主权项

一种牙龈上皮模型及其体外构建方法，其特征是：包括以下方法步骤；步骤一、牙龈上皮细胞的原代培养及扩增将正常人牙龈组织经处理获得单细胞悬液，加入角化细胞无血清培养基重新悬浮细胞，转至培养瓶中；然后使用P4~P20代细胞，培养液Ⅰ中培养，然后以胰酶消化制成单细胞悬液，置于37℃、5%CO2条件下培养进行扩增；步骤二、牙龈上皮细胞液下接种培养使用步骤一中扩增后的P4~P20代细胞，以培养液Ⅱ制成单细胞悬液，进行接种后培养1‑5小时后再转入液下培养；步骤三、牙龈上皮模型气液面的增殖分化培养将上述液下培养中的培养液弃掉，更换为培养液Ⅲ，进行气液面培养，再更换为培养液Ⅳ，继续进行气液面培养，最后更换为培养液Ⅴ，继续进行气液面培养，培养结束，牙龈上皮模型的体外构建结束。