[发明专利]一种聚丙烯酰胺变性凝胶制作方法及其应用

摘要

本发明提供了一种聚丙烯酰胺变性凝胶制作方法及其应用，属分子生物学领域。该变性凝胶由40%甲叉双丙烯酰胺和去离子甲酰胺在催化剂过硫酸铵、加速剂四甲基乙二胺以及变性剂尿素作用下聚合而成。变性凝胶电泳所用样品为200 bp左右的PCR扩增片段，凝胶浓度为8%，凝胶变性范围为32%‑56%，过硫酸铵与四甲基乙二胺用量分别为90‑110μL、18‑25μL，电泳条件为60℃、60 V、16h。本发明能够提高凝胶质量和制作的稳定性，及确保实验精度的可靠性，对200 bp左右的PCR产物具有非常好的分离效果。

主权项

1.一种聚丙烯酰胺变性凝胶制作方法及其应用，其特征步骤为：（1）利用通用引物SP2（其正向链F357‑GC‑clamp为5'‑CGC CCG CCG CGC CCC GCG CCC GGC CCG CCG CCCCCG CCC CCC TAC GGG AGG CAG CAG‑3'和反向链R518为5'‑ATT ACC GCG GCT GCT GG‑3'）扩增细菌16S rDNA V3区；（2）由4.8 mL 100%凝胶母液和10.2 mL 0%凝胶母液配制32%变性胶溶液，由8.4 mL 100%凝胶母液和6.6 mL 0%凝胶母液配制56%变性胶溶液；（3）向变性胶溶液中依次加入100 μL过硫酸铵（APS）和18 μL四甲基乙二胺（TEMED），摇匀，4 min内匀速完成灌胶，避光放置8h‑10 h。