[发明专利]利用Glycosylasparaginase酶释放及纯化制备还原性N‑糖链的方法在审
| 申请号： | 201710466217.5 | 申请日： | 2017-06-19 |
| 公开（公告）号： | CN107384987A | 公开（公告）日： | 2017-11-24 |
| 发明（设计）人： | 王仲孚;黄琳娟;张英;宋晶晶 | 申请（专利权）人： | 西北大学 |
| 主分类号： | C12P19/14 | 分类号： | C12P19/14;C12P21/06;C08B37/00;C08B37/02 |
| 代理公司： | 西安智萃知识产权代理有限公司61221 | 代理人： | 李炳辉 |
| 地址： | 710069 陕西省西安市*** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | 本发明属于糖生物技术领域，具体涉及一种利用Glycosylasparaginase酶释放及纯化制备还原性N‑糖链的方法。本发明的N‑糖链的酶解释放方法包括以下步骤向变性的糖蛋白进中加入Tris‑HCl缓冲液，溶解样品，加入适量的胰蛋白酶，得到含有N‑糖肽的酶解液；加入适量的Glycosylasparaginase酶，进行酶解反应，得到还原性N‑糖链。经过实验验证本方法可以适用于所有类型的N‑糖链的释放，包括α‑1,3‑Fuc修饰的N‑糖链的释放，并且操作简便，成本低廉，适于大规模应用，在生命科学和医药领域均具有重要的研究和应用价值。 | ||
| 搜索关键词： | 利用 glycosylasparaginase 释放 纯化 制备 原性 方法 | ||
【主权项】：
利用Glycosylasparaginase酶释放还原性N‑糖链的方法，其包括以下步骤：(a)向变性处理后的糖蛋白样品中加入Tris‑HCl缓冲液，溶解样品，然后加入适量的胰蛋白酶，在适宜条件下进行酶解反应，得到含有N‑糖肽的酶解液，终止胰蛋白酶的反应，冷却至室温；(b)向步骤(a)所得到的含有N‑糖肽的酶解液中加入适量的Glycosylasparaginase酶，合适条件下进行酶解反应，得到还原性N‑糖链。
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