[发明专利]一种重组短短芽孢杆菌的构建方法在审
| 申请号： | 201710467689.2 | 申请日： | 2017-06-20 |
| 公开（公告）号： | CN109055418A | 公开（公告）日： | 2018-12-21 |
| 发明（设计）人： | 曹远东;曾二生;潘烘;周志;张燕 | 申请（专利权）人： | 江西嘉博生物工程有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/75 | 分类号： | C12N15/75;C12N15/27;C12N15/66;C12N1/21 |
| 代理公司： | 南昌新天下专利商标代理有限公司 36115 | 代理人： | 谢德珍 |
| 地址： | 332600 江西省九江*** | 国省代码： | 江西;36 |
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| 摘要： | 一种重组短短芽孢杆菌的构建方法，包括以下步骤：首先合成猪粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（Porcine GM‑CSF）基因与短短芽孢杆菌（pNY326）质粒；再用BamHI和EcoRI分别对Porcine GM‑CSF基因和pNY326质粒进行双酶切，于37℃温箱反应3h；使用1.2%琼脂糖凝胶电泳回收Porcine GM‑CSF基因和pNY326质粒的酶切产物，并将回收的双酶切产物进行4℃过夜连接反应；将连接反应产物直接电转化短短芽孢杆菌SP3，电转完成后进行30℃摇床80rpm缓慢复苏1h；将复苏好的转化产物用新霉素抗性筛选转化子，获得重组短短芽孢杆菌。本发明可快速、简便的获得猪粒细胞巨噬细胞集落刺激因子。 | ||
| 搜索关键词： | 短短芽孢杆菌 质粒 粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 连接反应 双酶切 构建 基因 琼脂糖凝胶电泳回收 复苏 新霉素抗性 酶切产物 转化产物 电转化 转化子 电转 温箱 摇床 合成 筛选 回收 | ||
【主权项】：
1.一种重组短短芽孢杆菌的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：合成猪粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（Porcine GM‑CSF）基因与短短芽孢杆菌（pNY326）质粒；用BamHI和EcoRI分别对Porcine GM‑CSF基因和pNY326质粒进行双酶切，于37℃温箱反应3h；使用1.2 %琼脂糖凝胶电泳回收Porcine GM‑CSF基因和pNY326质粒的酶切产物，并将回收的双酶切产物进行4℃过夜连接反应；将连接反应产物直接电转化短短芽孢杆菌SP3，电转完成后进行30℃摇床80rpm缓慢复苏1h；将复苏好的转化产物用新霉素抗性筛选转化子，获得重组短短芽孢杆菌。
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