[发明专利]肝硬化的血清糖蛋白N-糖组图谱模型的建立方法

摘要

本发明公开了一种肝硬化的血清糖蛋白N‑糖组图谱模型的建立方法。所述方法采用G‑Test检测方法检测血清糖蛋白N‑糖组图谱，建立肝硬化患者和正常对照人员具有显著差异的N‑糖组图谱模型，筛选出肝硬化组和正常对照组间存在显著表达差异的NA3。基于本发明方法构建的N‑糖组图谱模型，对肝硬化的检测灵敏度和特异性分别达到84.3％和85.0％。在后续应用中，通过比对待检测人员血清的N‑糖组图谱中与本方法建立的图谱模型中单峰NA3的峰值，能够对待检测人员的肝硬化程度进行检测。基于本发明方法，能够让众多肝硬化患者接受常规、无创检测，帮助医生及患者及时监测肝硬化的发生和病情进展，有望在临床中推广使用。

主权项

1.肝硬化的血清糖蛋白N‑糖组图谱模型的建立方法，其特征在于，具体步骤如下：步骤1，收集肝硬化患者和正常对照人员的血清；步骤2，配制含有5％SDS的浓度为10mM、pH为8.3的NH4HCO3溶液为试剂A，试剂B由2.2U/μL的PNGaseF与3.33％的NP‑40按体积比为1：20混合配制，试剂C由20mM APTS和1M NaCNBH3等体积混合配制，试剂D由100mM NH4AC、2mU/μL的唾液酸酶和双氧水按体积比为5：1：14混合；步骤3，寡糖链的制备：往稀释一倍的血清中加入一半体积的试剂A，95℃反应5min变性，然后加入与血清体积相同的试剂B，37℃反应3h后干燥；步骤4，寡糖链的标记：在步骤3的液体中加入与试剂A体积相同的试剂C，65℃反应3h进行荧光标记，然后加入水终止标记反应；步骤5，去唾液酸处理：取等体积的步骤4荧光标记后的液体与试剂D在45℃反应3h，然后加入水终止反应；步骤6，寡糖链分离分析：取步骤5唾液酸处理后的液体，用DNA测序仪进行片段分析，得到N‑糖组图谱；步骤7，将得到的N‑糖组图谱进行峰值量化，用每个峰的峰高值除以所有峰的高度的总和，定量计算得到每个峰的相对含量，然后对量化后的肝硬化组和正常对照组N‑糖组图谱中的NA3的峰值进行比对统计分析。