[发明专利]一种活检肠道肿瘤类器官的培养、传代、冻存和复苏方法及其应用在审
| 申请号： | 201710483803.0 | 申请日： | 2017-06-15 |
| 公开（公告）号： | CN109136188A | 公开（公告）日： | 2019-01-04 |
| 发明（设计）人： | 柏卫华;祝远锋 | 申请（专利权）人： | 上海集技生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/09 | 分类号： | C12N5/09;A01N1/02;C12Q1/02 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 200032 上海市*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种活检肠道肿瘤类器官的培养、传代、冻存和复苏方法及其应用方法，通过对少量的活检肿瘤组织进行培养及传代，可培养出与其来源癌组织遗传背景高度一致，其遗传突变与对应组织标本中的突变高度匹配的类器官，同时培养的类器官还可以冻存和复苏，培养和药效测试时间较短，培养成本较PDTX模型经济，建立肿瘤类器官标本库可以实现高通量筛选药物，培养的类器官可以测试样本射线敏感性等等，应用广泛。 | ||
| 搜索关键词： | 器官 传代 冻存 肠道肿瘤 复苏 应用 高通量筛选 射线敏感性 测试样本 高度匹配 高度一致 药效测试 遗传背景 遗传突变 肿瘤组织 组织标本 癌组织 标本库 突变 肿瘤 | ||
【主权项】：
1.一种活检肠道肿瘤类器官的培养方法，其特征在于，包括如下步骤：1)取米粒至黄豆大小的活检肿瘤组织并置于冰PBS缓冲液中；2)采用预冷5‑10分钟的PBS缓冲液多次冲洗干净活检肿瘤组织；3)无菌切碎肿瘤组织并移入预热至37℃的酶消化液中，震荡消化30‑60分钟；4)消化完毕后使用移液枪反复吹打直至肿瘤碎片消失，并以100g‑300g转速离心5分钟；5)去除上清，60gx5分钟反复离心多次；6)去除上清，加10m1预冷PBS缓冲液，取10μl显微镜下观察计数隐窝数量，100‑300g5分钟离心，去干净上清，以100‑300个隐窝/50μl Matrigel比例重悬3D培养类器官。
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