[发明专利]一种叶酸功能化二氧化硅靶向纳米药物载体的定量检测方法

摘要

本发明提供了一种叶酸功能化二氧化硅靶向纳米药物载体的定量检测方法，基于抗原和抗体的特异性结合采用间接竞争酶联免疫法达到检测抗原或抗体的目的；且利用酶标二抗放大检测信号的作用，从而提高了实验分析的灵敏度。步骤包括：制备SiO₂‑FO包被抗原和免疫原，将免疫原注射到动物体内得到高特异性抗体，然后建立间接竞争酶联免疫法对SiO₂‑FO的含量进行了检测分析。本发明检测方法快速准确、操作简单、检测限低、可进行高通量测定。

主权项

1.一种叶酸功能化二氧化硅靶向纳米药物载体的定量检测方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：a、SiO₂‑FO包被抗原和免疫原的制备；b、抗SiO₂‑FO抗体的制备；所述SiO₂‑FO抗体的效价为1:64000；c、将SiO₂‑FO包被抗原经包被液稀释后包被于酶标板中，封闭、加入不同浓度的SiO₂‑FO标准品，以抗SiO₂‑FO抗体作为一抗，辣根过氧化物酶标记的羊抗兔抗体作为二抗，建立间接竞争酶联免疫分析法定量检测SiO₂‑FO；d、以SiO₂‑FO标准品浓度的对数为横坐标，吸光度值为纵坐标绘制标准曲线，从而定量检测出SiO₂‑FO的浓度；所述步骤a具体包括以下步骤：a‑1、称取10~20mg SiO₂‑FO溶于1~2mL PBS溶液中，磁力搅拌1~2h即得到水溶性的SiO₂‑FO溶液；a‑2、称取10~20mg OVA溶于2~4mL PBS溶液中,并在搅拌下加入步骤a‑1得到的SiO₂‑FO溶液，混合均匀后再滴加80~200μL 25%戊二醛溶液，25~28℃下避光搅拌2~5h；将反应液置于透析袋中，用PBS透析24h后收集即可得到SiO₂‑FO包被抗原，其浓度为2~4mg/mL；a‑3、称取10~20mg BSA溶于2~4mL PBS溶液中，并在搅拌下加入步骤a‑1得到的SiO₂‑FO溶液，混合均匀后再滴加80~200μL 25%戊二醛溶液，25~28℃下避光搅拌2~5h；将反应液置于透析袋中，用PBS透析24h后收集即可得到SiO₂‑FO免疫原，其浓度为2~4mg/mL。