[发明专利]制备神经干细胞的方法

摘要

本发明提供了一种更加稳定的神经干细胞的培养方法，通过原代神经干细胞悬浮培养，达到纯化细胞的目的，之后加入血清进行细胞贴壁培养，极大的加强了神经干细胞的活性，提高了神经干细胞的增殖速度。使神经干细胞的培养更加的稳定，更容易建成相应的神经干细胞系，可以收获大量的神经干细胞而不会出现像传统培养方法那样因没有足够的神经干细胞而不能进行相关科研工作的尴尬情况，培养过程中可以更加直观的观察细胞动态，可以做一些悬浮细胞无法进行的鉴定工作，并且本发明的制备方法更加简单，便于操作。

主权项

一种制备神经干细胞的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：1、在无菌条件取得神经组织放入神经组织保存液中，并在4～129℃的温度条件下密封保存；2、将步骤 l中的神经组织从神经组织保存液中取出，并使用神经组织洗涤液漂洗；3、将步骤 2中漂洗后的神经组织切成碎块，并加入2‑3倍体积的神经组织分解液，同时放入35～40℃的二氧化碳培养箱中消化分解45～60分钟，每隔3～5分钟取出震荡一次；4、向步骤 3中消化分解后的液体中加入继代细胞培养液，均匀混合后，混合液通过200目的细胞筛，收集过滤液，并使过滤液在1500转／分钟的条件下离心8分钟，其中，继代细胞培养液是神经组织分解液体积的2倍；5、离心后的过滤液去掉上清液，加入原代细胞培养液，使溶液中的细胞浓度为2×105个／毫升，并保持溶液中细胞悬浮培养，培养后即得到PO代神经干细胞。