[发明专利]远东疣柄牛肝菌抗氧化多糖及其提取分离工艺

摘要

本发明提供一种远东疣柄牛肝菌抗氧化多糖的提取分离工艺，包括以下步骤：1）远东疣柄牛肝菌子实体经脱脂处理得到脱脂牛肝菌子实体粉；2）脱脂牛肝菌子实体粉采用热水浸提，水提物依次经浓缩、醇沉、除蛋白、除色素、透析后，干燥得到多糖粗品；3）分别采用离子交换层析、分子筛层析纯化多糖粗品，收集洗脱液，冷冻干燥即得远东疣柄牛肝菌抗氧化多糖。通过体外自由基清除能力实验，结果表明分子量342375 Da的多糖组分具有明显的抗氧化作用。本发明开发的产品安全，可将远东疣柄牛肝菌抗氧化多糖广泛作为食品添加剂。

主权项

1.一种远东疣柄牛肝菌抗氧化多糖在清除自由基中的应用，其特征在于，其分子量为342375 Da；由岩藻糖、阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、木糖和甘露糖6种单糖组成，还含有糖醛酸，各单糖对应的摩尔质量比分别为1.82:0.61:5.14:26:5.41:61.02，甘露糖和葡萄糖的质量百分含量较高，分别为61.02％和26％，多糖中的化学键包括O-H、C-H、羰基C=O对称及非对称区域、葡萄糖中特有的-OH变角振动区域、β-吡喃糖苷键；/n上述远东疣柄牛肝菌抗氧化多糖的提取分离工艺，包括以下步骤：/n1）远东疣柄牛肝菌子实体经脱脂处理得到脱脂牛肝菌子实体粉；/n2）脱脂牛肝菌子实体粉采用热水浸提，水提物依次经浓缩、醇沉、除蛋白、除色素、透析后，干燥得到多糖粗品；/n3）分别采用离子交换层析、分子筛层析纯化多糖粗品，收集洗脱液，冷冻干燥即得远东疣柄牛肝菌抗氧化多糖；/n步骤1）具体为：称取2g远东疣柄牛肝菌子实体，烘干，粉碎，过100目筛，加入4倍体积的80％乙醇，在60℃水浴锅中保温2 h，3500 rpm离心5 min，取沉淀，于60℃水浴锅中蒸干得到脱脂牛肝菌子实体粉；/n步骤2）具体为：热水浸提的条件为：液料比按mL:g计为33:1，提取温度为75℃，提取时间为3h；脱脂牛肝菌子实体粉经热水浸提后，3500rpm离心10 min获得多糖上清液，用旋转蒸发仪浓缩至原体积的1/3，于35-40℃加入4倍体积80％乙醇，4℃醇沉24h，3500 rpm离心10-15 min，取多糖上清液，将上清液与Sevage试剂按1:1的体积比混合，3500rpm离心5min，取多糖上清液，按照1-5 w/v %的比例向收集的上清液中加入活性炭，调节溶液pH至4.5，于40℃恒温水浴锅中水浴反应2h，过滤除掉活性炭，得到除色素后的多糖溶液；向多糖溶液中加入其4倍体积的无水乙醇，于4℃醇沉24h，然后3500rpm离心15min，收集多糖溶液的沉淀物，将沉淀物用适量无水乙醇洗涤3-4次，然后在冷冻烘干机中烘干得到粗多糖；将粗多糖用蒸馏水按料液比g:mL=1:100-150进行复溶，复溶后釆用截留分子量8000-14000Da的透析袋流水透析3d，然后将透析袋置于蒸馏水中透析2d，保证每隔3-5h换一次透析容器中的水；透析后，将透析袋内的多糖溶液干燥，即得多糖粗品；/n步骤3）进行离子交换层析、分子筛层析使用的层析柱分别为DEAE-52纤维素柱、Sephadex G-200凝胶柱，规格分别为2.6cm×60cm、1.6 cm×80cm；/nSevage试剂为正丁醇∶氯仿=1∶5。/n