[发明专利]MSCs来源的少突胶质细胞的制备方法及试剂盒

摘要

本发明公开了一种MSCs来源的少突胶质细胞制备试剂盒，包括OPCs无血清基础培养基、OPCs培养添加剂1、OPCs培养添加剂2及OPCs培养表面包被液，其中，所述OPCs无血清基础培养基为含有B27，N2，L‑谷氨酰胺，1,25‑二羟维生素D3，三碘甲状腺氨酸，人褪黑素的DMEM/F12培养基；所述OPCs培养添加剂1为含有重组人碱性成纤维细胞生长因子、重组人表皮生长因子的DMEM/F12培养基；所述OPCs培养添加剂2为含有重组人血小板来源生长因子AA、重组人神经营养因子3的DMEM/F12培养基；所述OPCs培养表面包被液为含有重组人层黏连蛋白、重组人玻连蛋白的DMEM/F12培养基。

主权项

1.一种MSCs来源的少突胶质细胞制备方法，其特征在于，包括如下步骤：S1.用经DMEM/F12培养基稀释10倍的OPCs培养表面包被液室温包被培养表面1小时，吸弃包被液，经PBS漂洗后置于4℃保存不超过1周；S2.P2代的MSCs按6000个/cm²接种，以含10%无动物源成分血清替代品的MSCs培养基培养至60‑70%汇合；S3.换含OPCs培养添加剂1的OPCs无血清基础培养基，培养至80‑90%汇合，用胰蛋白酶溶液消化收获细胞，记为神经上皮预诱导细胞；S4.以含OPCs培养添加剂1和OPCs培养添加剂2的OPCs无血清基础培养基重悬神经上皮预诱导细胞，调整细胞密度至1.5×10⁴/cm²，接种至被OPCs培养表面包被液包被的培养表面，培养至60‑80%汇合时传代，记为P0代OPCs；其中，所述OPCs无血清基础培养基为含有1×B27，1×N2，2mM L‑谷氨酰胺，1uM 1,25‑二羟维生素D3，40ng/mL三碘甲状腺氨酸，0.5ug/mL人褪黑素的DMEM/F12培养基；所述OPCs培养添加剂1为含有1 ug /mL重组人碱性成纤维细胞生长因子、1 ug /mL重组人表皮生长因子的DMEM/F12培养基；所述OPCs培养添加剂2为含有1 ug重组人血小板来源生长因子AA、100ng/mL重组人神经营养因子3的DMEM/F12培养基；所述OPCs培养表面包被液为含有100ng/mL重组人层黏连蛋白、100ng/mL重组人玻连蛋白的DMEM/F12培养基；所述含OPCs培养添加剂1的OPCs无血清基础培养基中OPCs培养添加剂1含量为2%；所述含OPCs培养添加剂1和OPCs培养添加剂2的OPCs无血清基础培养基中OPCs培养添加剂1的含量为2%，OPCs培养添加剂2的含量为2%。