[发明专利]一种赭曲霉素A免疫亲和柱的制备方法

摘要

本发明公开了一种赭曲霉素A免疫亲和柱的制备方法，所述方法包括交联壳聚糖基质的制备、抗体与交联壳聚糖的偶联以及装柱工序。本发明利用二醛和单醛分别对壳聚糖进行交联反应，形成氨基反应完全且富含羟基的交联壳聚糖基质；利用交联壳聚糖与甲基环氧氯丙烷进行交联活化反应，避免了赭曲霉素A单抗中的结合活性位置与交联壳聚糖的非特异性相互作用，使绝大部分抗体处于游离状态；交联壳聚糖的活化反应与偶联抗体的反应分开进行，从而最大限度的保证了赭曲霉素A单抗的活性。

主权项

一种赭曲霉素A免疫亲和柱的制备方法，其特征在于，所述方法包括交联壳聚糖基质的制备、抗体与交联壳聚糖的偶联以及装柱工序，具体工艺步骤如下所述：1）交联壳聚糖基质的制备：称取壳聚糖溶于体积分数1%醋酸溶液中，搅拌并超声至完全溶解；壳聚糖经过二醛交联、单醛交联，真空干燥得到交联壳聚糖基质；2）抗体与交联壳聚糖的偶联：a．取步骤1）交联壳聚糖，悬浮于甲基环氧氯丙烷中，缓慢滴加氢氧化钠水溶液，于50‑70℃恒温水浴振荡器上活化反应4‑8h，反应结束后，用水反复洗涤，真空干燥，得到活化壳聚糖备用；b．将活化壳聚糖分散于赭曲霉素A抗体的磷酸盐缓冲液中，于35‑39℃恒温水浴振荡器上活化反应，直至溶液中赭曲霉素A抗体的浓度不发生变化为止，待反应结束后，得到偶联抗体的交联壳聚糖混悬液；3）装柱：取步骤2）制备的混悬液装柱，沉降，分别用纯水、磷酸盐缓冲液进行洗涤至赭曲霉素A抗体不能检出，在4℃下磷酸盐缓冲液中保存，即得到赭曲霉素A免疫亲和柱。