[发明专利]猪pCRTC3-sgRNA表达载体的构建方法及用途有效
| 申请号： | 201710518486.1 | 申请日： | 2017-06-30 |
| 公开（公告）号： | CN107245498B | 公开（公告）日： | 2020-01-31 |
| 发明（设计）人： | 单体中;刘嘉琪;徐子叶;汪以真 | 申请（专利权）人： | 浙江大学 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/12 |
| 代理公司： | 33212 杭州中成专利事务所有限公司 | 代理人： | 金祺 |
| 地址： | 310058 浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种猪CRTC3的pCRTC3‑sgRNA表达载体的构建方法，包括以下步骤：1)、根据载体的内切酶位点信息和pCRTC3序列得到4个靶序列，根据所述靶序列设计并合成4对sgRNA引物；2)、pCRTC3‑sgRNA表达载体的构建：BbsI酶切的pX330‑Cas9载体与pCRTC3的sgRNA引物退火后产物连接转化，得到pCRTC3‑sgRNA表达载体的重组质粒。本发明还同时公开了上述pCRTC3‑sgRNA表达载体的用途：用于敲除猪细胞中pCRTC3基因的表达；用于研究pCRTC3基因对猪肠道上皮细胞IPEC‑J2细胞紧密连接蛋白和糖脂代谢关键基因表达产生的影响。 | ||
| 搜索关键词： | pcrtc3 sgrna 表达 载体 构建 方法 用途 | ||
【主权项】：
1.猪CRTC3的 pCRTC3-sgRNA表达载体的构建方法，其特征是包括以下步骤：/n1）、根据载体的内切酶位点信息和pCRTC3序列得到4个靶序列，根据所述靶序列设计并合成2对sgRNA引物；/n所述2对sgRNA引物为：/n引物Ⅰ：/npCRTC3-sg1 S: 5 ′ - CACCGGAGAATGATGTCCACGGGGA -3 ′/npCRTC3-sg1 AS: 5 ′ - AAACTCCCCGTGGACATCATTCTCC -3 ′，/n引物Ⅳ：/npCRTC3-sg4 S: 5 ′- CACCGGTCCTTCCCCAGCCCGTTGA -3 ′/npCRTC3-sg4 AS: 5 ′- AAACTCAACGGGCTGGGGAAGGACC -3 ′；/n2）、pCRTC3-sgRNA表达载体的构建：BbsI 酶切的pX330-Cas9载体与pCRTC3的sgRNA引物退火后产物连接转化，得到pCRTC3-sgRNA表达载体。/n
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