[发明专利]对E.coli O157:H7免酶及免荧光标记的检测方法有效
| 申请号： | 201710522391.7 | 申请日： | 2017-06-30 |
| 公开（公告）号： | CN107817228B | 公开（公告）日： | 2022-06-14 |
| 发明（设计）人： | 邹立扣;陈姝娟;付珍珍;余华;严玉宝;刘书亮;周康;敖晓琳;何利;杨勇 | 申请（专利权）人： | 四川农业大学;中华人民共和国四川出入境检验检疫局 |
| 主分类号： | G01N21/64 | 分类号： | G01N21/64 |
| 代理公司： | 成都玖和知识产权代理事务所(普通合伙) 51238 | 代理人： | 黎祖琴 |
| 地址： | 610000 四川省成*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种对E.coli O157:H7进行免酶及免荧光标记的检测方法，其包括如下步骤：将IS与适配子杂化，所述IS的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述适配子的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示；将所得物置于缓冲液中，加入E.coli O157:H7，于37℃下反应30min；加入GHP1和GHP2，于37℃孵育100min；所述GHP1的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示，所述GHP2的核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示；加入NMM，于37℃下孵育30min；对所得物进行荧光强度检测。 | ||
| 搜索关键词： | coli o157 h7 荧光 标记 检测 方法 | ||
【主权项】：
一种对Escherichia coli O157:H7进行无酶及无标签化的检测方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：(1)将IS与适配子杂化，所述IS的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述适配子的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示；(2)将步骤(1)所得物置于缓冲液中，加入Escherichia coli O157:H7，于37℃下反应30min；(3)向步骤(2)所得物加入GHP1和GHP2，于37℃孵育100min；所述GHP1的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示，所述GHP2的核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示；(4)向步骤(3)所得物加入NMM，于37℃下孵育30min；所述NMM为N‑甲基中卟啉(N‑methyl mesoporphyrin IX)；(5)对步骤(4)所得物进行荧光强度检测；优选的，步骤(1)所述杂化的条件为：于80～90℃，处理40‑55min。
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