[发明专利]基于His标签的PNGaseF固定方法在审
| 申请号： | 201710522448.3 | 申请日： | 2017-06-30 |
| 公开（公告）号： | CN107325186A | 公开（公告）日： | 2017-11-07 |
| 发明（设计）人： | 刘欣;张亮;王畅;吴亦可;刘胜 | 申请（专利权）人： | 华中科技大学鄂州工业技术研究院;华中科技大学 |
| 主分类号： | C07K19/00 | 分类号： | C07K19/00;C12N9/80;C12N11/14 |
| 代理公司： | 武汉智嘉联合知识产权代理事务所(普通合伙)42231 | 代理人： | 黄君军 |
| 地址： | 436044 湖北*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种基于His标签的PNGase F固定方法，属于固定化酶领域，本发明将His标签的PNGase F与含有修饰IDA/Ni的磁性颗粒(MNP‑IDA/Ni)进行固定，将MNP‑IDA/N作为固定材料，不仅体积小、比表面积大，而且能够方便快捷地被磁分离，得到相对纯净的反应底物，且本发明对PNGase F的固定效率远远高于传统的物理方法，不易被普通缓冲液或反应液洗脱，而且不同于一般的非定向化学固定，不干扰酶活性。 | ||
| 搜索关键词： | 基于 his 标签 pngasef 固定 方法 | ||
【主权项】：
一种基于His标签的PNGase F固定方法，其特征在于：该方法将His标签的PNGase F与含有修饰IDA/Ni的磁性颗粒进行固定，具体包括如下步骤：(1)固定相MNP‑IDA/Ni置于离心管中，磁分离，弃上清；然后加入耦联反应液重悬固定相，磁分离，弃上清，使用耦联缓冲液清洗三次；所述耦联反应液为20mM Tris、50mMNaCl、pH 7.5；(2)步骤(1)的MNP‑IDA/Ni中加入带有His标签的PNGase F酶液，4℃，100rpm/min反应60min，所述MNP‑IDA/Ni与PNGase F酶的体积比为5:2；(3)固定后的MNP‑IDA/Ni‑PNGase F置于磁场中分离，弃上清,然后加入耦联反应液重悬MNP‑IDA/Ni‑PNGase F，清洗MNP‑IDA/Ni‑PNGase F，磁分离，弃上清，使用耦联反应液清洗3次。
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