[发明专利]一种新型病毒体外三维培养模型的建立方法

摘要

本发明提供了一种新型病毒体外三维培养模型的建立方法，包括以下操作步骤（1）微载体混悬液的准备；（2）细胞贴壁阻滞剂制备；（3）准备6孔板，将制备好的细胞贴壁阻滞剂均匀铺在6孔板里，静置风干，再将制备好的细胞以105/ml的浓度接种于6孔板中，再加入制备好的微载体混悬液，细胞液与微载体混悬液的比例为41，混匀后，放置于细胞培养箱内，3‑4天等细胞三维结构成型后，即可进行病毒接种实验。该方法既能避免动物体内实验带来的高成本，又能最大程度的模拟动物体内生长模式，使所培养的细胞呈现立体生长方式，形成类似体内的组织结构，进而有助于模拟病毒体内的致病过程，该模型方法简便，成本低廉，推广方便。

主权项

一种新型病毒体外三维培养模型的建立方法，其特征在于：包括以下操作步骤（1）微载体混悬液的准备：称取1‑3份的微载体，置于玻璃容器内，按照微载体1份：50ml磷酸盐缓冲液的比例加入磷酸盐缓冲液，混匀1‑3h，然后再用新鲜的清洗液洗涤2‑3次，再按照微载体1份：50ml磷酸盐缓冲液的比例加入新鲜的磷酸盐缓冲液，高压灭菌，冷却后4℃保存；（2）细胞贴壁阻滞剂制备：按照2.5%的浓度制备，称取细胞贴壁阻滞剂粉末，加入无水乙醇，密封后混匀10‑30分钟，4℃保存；（3）准备6孔板，将制备好的细胞贴壁阻滞剂均匀铺在6孔板里，静置风干，再将制备好的细胞以105/ml的浓度接种于6孔板中，所述细胞的培养基包括70‑90%的基础培养基以及10‑30%的胎牛血清；所述基础培养基以重量组分计，包括以下组分：葡萄糖 80‑90份、碳酸氢钠10‑20份、丙酮酸钠8‑18份、丝胶蛋白3‑12份、氯化钾 30‑50份、无水硫酸镁 5‑12份、氯化钠60‑80份、无水磷酸二氢钠 8‑16份、叶酸 0.2‑0.6份、肌醇0.5‑1.5份、烟酰胺0.2‑0.8份、无水氯化钙20‑40份、硝酸铁0.1‑0.5份、丁二酸 5‑10份、丁二酸钠9‑18份、D‑泛酸钙 0.2‑0.8份、酒石酸胆碱0.5‑1份、核黄素0.1‑0.3份、盐酸硫胺0.1‑0.5份、盐酸吡哆辛 0.1‑0.6份、N‑异丙基丙烯酰胺0.1‑0.5份、亚麻酸0.3‑3份、乙醇胺0.5‑0.8份、芳香酸酯0.2‑0.9份、酚红钠0.8‑1.5份和去离子水100份；再加入制备好的微载体混悬液，细胞液与微载体混悬液比例为4:1，混匀后，放置于细胞培养箱内，3‑4天等细胞三维结构成型后，即可进行病毒接种实验。