[发明专利]一种转化态纳米材料致哺乳动物癌变的方法

摘要

本发明公开了一种转化态纳米材料致哺乳动物癌变的方法，包括以下实验步骤转化态纳米材料母液的配制；原初态和转化态纳米材料致哺乳动物细胞恶性转化的慢性处理；用原初态和转化态纳米材料诱发小鼠癌症和对小鼠进行病理研究。现有纳米材料致癌性的研究结果基本都是阴性的，其中一个原因在于缺乏适用于纳米材料的慢性暴露的方法，另一个原因在于目前研究大多针对“原初态”纳米材料，忽视了“转化态”纳米材料的毒性评估。本发明在现有技术的基础上，将经过转化态纳米材料处理后发生了恶性转化的哺乳动物细胞注射入小鼠皮下，观察其对小鼠癌变的影响，本发明能为纳米材料的致癌性研究提供体内实验数据，具有重要的现实意义。

主权项

一种转化态纳米材料致哺乳动物癌变的方法，其特征在于，包括以下实验步骤：步骤一、转化态纳米材料母液的配制：将纳米氧化锌分散于超纯水中，然后用氢氧化钠溶液调节pH值，配置成浓度为1mg/ml的原初态纳米材料储备液，高温、高压灭菌后，室温避光保存，每隔10天对所述原初态纳米材料储备液进行数据表征，直至数据结果显示所述原初态纳米材料储备液的物化性质发生改变，即得转化态纳米材料母液，备用；步骤二、原初态和转化态纳米材料致哺乳动物细胞恶性转化的慢性处理，操作如下：A.将正常小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)用含10％胎牛血清的DMEM培养基在培养箱中培养；B.分别取两皿处于对数期的、满度为80％的MEF细胞，经胰蛋白酶消化后分别种植于60mm培养皿中，培养24小时，待细胞生长至对数生长期后，弃去原培养基溶液；向其中一个培养皿中加入稀释后的所述原初态纳米材料储备液与含10％胎牛血清的DMEM培养基混合液；向另一个培养皿中加入稀释后的所述转化态纳米材料母液与含10％胎牛血清的DMEM培养基混合液；培养24小时后，去除每个培养皿中的培养基混合液，每皿细胞用1.5ml磷酸盐缓冲液漂洗3遍，漂洗后，每个培养皿细胞中再加入4ml含10％胎牛血清的DMEM培养基连续培养3天；待长满后，用胰蛋白酶酶解消化后开始第二轮纳米材料的慢性处理；循环操作，连续暴露60代完成慢性暴露的过程；步骤三、用原初态和转化态纳米材料诱发裸鼠成瘤：将4周龄的雌BALB/c裸鼠，SPF级环境中饲养一周后，提取步骤二中正处于对数生长期的、经过原初态纳米氧化锌慢性刺激达6个月的并发生恶性转化的MEF细胞和经过转化态纳米氧化锌慢性刺激达6个月的并发生恶性转化的MEF细胞组成细胞悬液，将所述细胞悬液在无菌培养室内接种至裸鼠皮下，诱发成瘤。