[发明专利]测定肠内菌中芍药苷代谢物的液质联用方法

摘要

本发明涉及测定肠内菌中芍药苷代谢物的液质联用方法。采用的技术方案是：肠内菌的制备；芍药苷的肠内菌转化；样品处理和代谢物分析，即通过液质联用方法进行肠内菌中芍药苷代谢物结构鉴定。本发明的优点在于：操作简便，样品处理简单、分析速度快、灵敏度高。该方法可以同时检测芍药苷的更多代谢产物，且用该分析方法能更多、更准确推测出代谢产物的结构，为芍药苷的体内外代谢提供了重要的参考，对深入研究活性产物及其作用机制具有重要意义。

主权项

1.测定肠内菌中芍药苷代谢物的液质联用方法，其特征在于包括如下步骤：1)肠内菌的制备：取粪便，在无菌无氧操作条件下，将粪便放入到一个充满氮气的自封袋中，使粪便均质化，然后放入到灭菌完毕的GAM培养基中，轻轻振摇，置无菌厌氧恒温培养箱中，在37℃下培养24h；2)芍药苷的肠内菌转化：在无菌厌氧培养箱中，向培养的肠内菌中加入芍药苷，然后放置在37℃恒温摇床上振摇，速度为100r/min，培养2‑24h，取出，加入乙酸乙酯终止反应，得芍药苷的肠内菌代谢产物；3)样品处理：采用萃取液萃取芍药苷的肠内菌代谢产物三次，合并有机相，旋转蒸干，再用甲醇转移至EP管中，过0.22μm微孔滤膜，获得代谢产物样品；4)样品测定：具体条件如下：色谱条件：色谱柱：Dikma Diamonsil^TMODS C₁₈色谱柱；洗脱时间：t＝50min；进样量：10μL；检测波长：λ＝230nm；柱温：30℃；流速：0.5mL/min；流动相：水+甲醇，采用梯度洗脱，程序如表1所示；表1时间min流速mL/min水％甲醇％00.58515100.57030200.56040350.50100500.50100质谱条件：一级质谱：电离模式：电喷雾电离ESI；扫描模式：正离子扫描；电喷雾电压：4.0bar；干燥气流速：10L/min；干燥气温度：200℃；二级质谱：电离模式：电喷雾电离ESI；扫描模式：正离子扫描；碰撞气：氮气；毛细管电压：2.8kV；锥孔电压：3.0V；源温度：110℃；脱溶剂温度：350℃；脱溶剂气体流量：50L/Hr；碰撞能量：15‑35eV。