[发明专利]一种表达miRNA的AAV辅助包装载体及该载体的构建方法、筛选方法和应用有效
| 申请号： | 201710553167.4 | 申请日： | 2017-07-07 |
| 公开（公告）号： | CN107384957B | 公开（公告）日： | 2019-04-19 |
| 发明（设计）人： | 李华鹏 | 申请（专利权）人： | 广州派真生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/66;C12Q1/6869;C12N7/00 |
| 代理公司： | 广州三环专利商标代理有限公司 44202 | 代理人： | 郝传鑫 |
| 地址： | 511370 广东省广州市高新技术*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明涉及基因工程领域，具体涉及一种表达miRNA的AAV辅助包装载体及该载体的构建方法、筛选方法和应用；所述载体基于Rep2与CapDJ辅助包装载体，在CMV启动子驱动下的miR33‑5’UTR和miR33‑3’UTR之间插入克隆miRNA的位点2×BsmBI，miRNA表达小片段连接入所述骨架载体的2xBsmBI位点。所述载体的构建方法包括：制备克隆用骨架；制备miRNA表达小片段；将miRNA表达小片段连接至克隆用骨架载体上。所述筛选方法包括：用所述载体转化Stbl3感受态细菌，质粒提取；将提取的质粒共转染293T细胞；滴度比较筛选。本发明实现提高AAV生产效率约50％以上。 | ||
| 搜索关键词： | 辅助包装 小片段 构建 筛选 位点 制备 克隆 克隆用骨架载体 基因工程领域 感受态细菌 骨架载体 生产效率 质粒共转 质粒提取 滴度 应用 驱动 细胞 转化 | ||
【主权项】：
1.一种表达miRNA的AAV辅助包装载体，其特征在于，所述载体基于Rep2与CapDJ辅助包装载体，在CMV启动子驱动下的miR33‑5’UTR和miR33‑3’UTR之间插入克隆miRNA的位点2×BsmBI，miRNA表达小片段连接入所述骨架载体的2xBsmBI位点，并以合成的pA终止子终止转录，其中，miR33‑5’UTR的碱基序列如SEQ ID NO:1所示，miR33‑3’UTR的碱基序列如SEQ ID NO:2所示，所述miRNA的碱基序列如SEQ ID NO:3所示。
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