[发明专利]一种肿瘤细胞耐受促凋亡蛋白质分子数目绝对定量的测量方法有效
| 申请号： | 201710556774.6 | 申请日： | 2017-07-10 |
| 公开（公告）号： | CN107367455B | 公开（公告）日： | 2020-10-16 |
| 发明（设计）人： | 戴海明;王宏志;江海河;王姝洁 | 申请（专利权）人： | 中国科学院合肥物质科学研究院 |
| 主分类号： | G01N15/14 | 分类号： | G01N15/14 |
| 代理公司： | 安徽合肥华信知识产权代理有限公司 34112 | 代理人： | 余成俊 |
| 地址： | 230031 *** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种肿瘤细胞耐受促凋亡蛋白质分子数目绝对定量的测量方法。本方法通过EGFP标记促凋亡蛋白质，并通过流式细胞术测量肿瘤细胞所能耐受促凋亡蛋白质分子时的EGFP数值，通过FITC标记的荧光微球以及FITC与EGFP的激发荧光强度的换算，实现肿瘤细胞耐受促凋亡蛋白质分子数目的绝对定量的测量。本发明方法不仅解决了传统研究中蛋白质含量增加多少倍引起细胞凋亡而缺少绝对数值的问题，也避免了利用BH3分析方法中遇到的BH3小肽的活性问题以及BH3小肽与BH3蛋白质之间的区别问题，实现了肿瘤活细胞耐受促凋亡蛋白质分子的绝对定量测试。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 肿瘤 细胞 耐受 促凋亡 蛋白质 分子 数目 绝对 定量 测量方法 | ||
【主权项】：
一种肿瘤细胞耐受促凋亡蛋白质分子数目绝对定量的测量方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）利用EGFP末端标记促凋亡分子DNA来实现对促凋亡分子的标记，为活细胞内定量测量做准备；（2）通过荧光染料APC标记的Annexin V来标记凋亡细胞，实现凋亡细胞的检测；（3）通过流式细胞仪检测分析肿瘤细胞耐受促凋亡分子相应的EGFP的荧光强度；（4）使用带有不同数量的标准FITC荧光微球的参照管来实现绝对定量；（5）通过荧光光谱仪测定一定量的FITC和EGFP分子发射光强度来实现FITC与EGFP的换算，得到可以得到肿瘤细胞耐受促凋亡分子的EGFP的绝对数值。
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