[发明专利]一种重组融合蛋白V12‑CD137L的制备方法及应用

摘要

本发明涉及生物医药技术领域，特别是用于重组蛋白促进淋巴细胞体外培养的一种重组融合蛋白V12‑CD137L的制备方法及应用。本发明为人工设计一种重组融合蛋白V12‑CD137L，该蛋白由艾滋病病毒gp120中的V1V2区与CD137L的功能区结合而成，兼具靶向定位淋巴细胞的功能和CD137L蛋白功能；V12‑CD137L通过大肠杆菌表达，层析柱分离、纯化，最终得到高纯度、高活性的重组蛋白。该重组蛋白可以有效提高淋巴细胞在体外的增殖，分化水平，同时还可以增强机体的细胞免疫水平，并通过大肠杆菌表达，大大提高了制备效率，有利于工业化生产。

主权项

一种重组融合蛋白V12‑CD137L的制备方法，其特征在于所述的重组融合蛋白V12‑CD137L是由艾滋病病毒gp120蛋白中的与淋巴细胞具有亲和功能的V1V2区与CD137L的功能区结合而成，其氨基酸序列为SEQ ID NO.1所示，表达重组融合蛋白V12‑CD137L的核苷酸序列为SEQ ID NO.2所示；SEQ ID NO.2基因序列通过以下步骤得到V12‑CD137L重组融合蛋白：(1) 人工合成SEQ ID NO.2基因，将融合基因插入大肠杆菌表达系统，获得表达V12‑CD137L重组蛋白的重组大肠杆菌；(2) 将步骤(1)所得重组大肠杆菌进行37℃培养，20‑25℃诱导其表达重组蛋白V12‑CD137L，获得诱导后的重组大肠杆菌；(3) 将步骤(2)所得诱导后的重组大肠杆菌进行细胞破碎，通过离心获得重组大肠杆菌破碎上清液；(4) 将步骤(3)所得重组大肠杆菌破碎上清液通过层析柱进行分离纯化，得到V12‑CD137L重组蛋白纯化液；(5) 将步骤(4)所得V12‑CD137L重组蛋白纯化液置于透析袋中，用透析液进行透析，获得稳定的V12‑CD137L重组融合蛋白。