[发明专利]一种蜜蜂卵超低温冷冻方法及其配套工具

摘要

本发明公开了一种蜜蜂卵超低温冷冻方法及其配套工具，涉及生物技术领域，其方法包括蜂卵获取、蜂卵收集、蜂卵渗透平衡、蜂卵冻前准备、蜂卵滴冻、蜂卵集中冻存、蜂卵解冻与复水、蜂卵移植和培养共八个工艺过程，本发明的方法操作简单，基于配合蜜蜂卵超低温冷冻贮存技术而实现，配合所使用的成套专用工具，提高了蜜蜂卵在冷冻解冻过程中的存活率，重复性和稳定性好，操作方便；且所使用的工具结构简单，实用性强，制造成本低廉，无需复杂的设备即可完成蜂卵的超低温冷冻。

主权项

一种蜜蜂卵超低温冷冻方法，其特征在于，包括下述步骤：(1)蜂卵获取：将蜂王装入蜂王产卵控制笼内，送入蜂群，囚禁蜂王控制笼内产卵，次日取出产有蜂卵的台基条备用；(2)蜂卵收集：将产有蜜蜂卵的台基条固定到木质支架上，用滴管吸取预先配制好的生理液，逐滴滴加到粘有蜂卵的台基上，将卵覆盖，用卵的塑料剥离针在20倍体式显微镜下将生理液内的蜂卵逐粒剥离台基，使卵悬浮于液体内，再将该台基条立于一洁净培养皿内，用吸有生理液的滴管将剥离的蜂卵全部冲入培养皿内，逐条冲洗，将所有蜂卵都收集到该培养皿内；(3)蜂卵渗透平衡：用滴管吸取培养皿内收集到一起的蜂卵，将其加入到平衡漏斗内，打开止水夹，生理液流出至废液皿，关闭止水夹，依次加入适量的蜂卵梯度渗透液一，分别渗透处理一定时间，使蜂卵脱水和渗透平衡，最后加入蜂卵冷冻保护液继续平衡；(4)蜂卵冻前准备：在3L的广口玻璃内胆保温瓶内加入一定量制冷的液氮，将玻璃化冷冻滴冻盘悬于液氮之上，通过调节提钩位置，使盘体距离液氮面适当高度位置，降温平衡后用于蜂卵的滴冻；(5)蜂卵滴冻：用滴管吸取悬有蜂卵的冷冻保护液，逐滴滴入玻璃化冷冻滴冻盘上的圆形凹陷内，冷冻保护液会迅速冷冻进入玻璃化状态；(6)蜂卵集中冻存：将玻璃化冷冻的蜂卵集中入冻存管内密封并标记，投入到液氮内长期保存；(7)蜂卵解冻与复水：取出装有蜂卵的冻存管，升温平衡一定时间后，将玻璃态颗粒投入解冻液内，迅速解冻，再将悬浮有蜂卵的解冻液转移入平衡漏斗内，将蜂卵集中，依次加入适量的蜂卵梯度渗透液二，分别渗透处理一定时间，使蜂卵吸水和渗透复原，最后加入蜂卵生理液继续复水；(8)蜂卵移植和培养：用配有进样器的塑料吸持针吸持住经过检验合格的蜜蜂卵的头部，将其移动并立于台基条的台基上，所有蜂卵移植完毕后，将台基条固定到蜂卵培养盒内，并将培养盒置于恒温恒湿培养箱中，调节适宜的温湿度进行蜂卵培养。