[发明专利]一种脐血Treg细胞的体外扩增方法有效
| 申请号： | 201710582097.5 | 申请日： | 2017-07-17 |
| 公开（公告）号： | CN107164324B | 公开（公告）日： | 2020-03-27 |
| 发明（设计）人： | 林词雄;王旭;李陶;林洁璇;朱刚 | 申请（专利权）人： | 沃昕生物科技（深圳）有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0783 | 分类号： | C12N5/0783 |
| 代理公司： | 北京睿派知识产权代理事务所(普通合伙) 11597 | 代理人： | 刘锋 |
| 地址： | 518000 广东省深圳市宝安区新安*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种脐血Treg细胞的体外扩增方法，包括以下步骤；S1：从分离单个核细胞；S2：调整细胞密度，接种至培养瓶，添加灭活血浆；第一天：加入拟雌内酯、TGF‑β、CD3/CD28单克隆抗体和IL‑2；S3：第四天：补加培养基，并添加灭活血浆、拟雌内酯和TGF‑β并使其终浓度保持不变；S4：第六天：补加培养基，并使其他成分的终浓度均保持不变；S5：第九天：补加培养基，并并使其他成分的终浓度均保持不变；S6：第十二天：收集细胞。该方法采用拟雌内酯+TGF‑β共同作用诱导CD4+CD25+Tregs的扩增，扩增效率高，无需预先纯化便可得到高纯度的Treg细胞。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 treg 细胞 体外 扩增 方法 | ||
【主权项】：
一种脐血Treg细胞的体外扩增方法，其特征在于：所述提取方法包括以下步骤；S1：从脐血中分离单个核细胞；S2：采用培养基将单个核细胞的细胞密度调整至(0.1x106)～(10x106)/ml，然后将该密度的单个核细胞接种至培养瓶，添加灭活血浆；第一天：向培养瓶中加入拟雌内酯、TGF‑β、CD3/CD28单克隆抗体和IL‑2；S3：第四天：补加培养基，并添加灭活血浆、拟雌内酯、TGF‑β、CD3/CD28单克隆抗体和IL‑2并使其终浓度与步骤S2中各种成分的终浓度一致；S4：第六天：补加培养基，并添加灭活血浆、拟雌内酯、TGF‑β、CD3/CD28单克隆抗体和IL‑2并使其终浓度均保持不变；S5：第九天：补加培养基，并添加灭活血浆、拟雌内酯、TGF‑β、CD3/CD28单克隆抗体和IL‑2并使其终浓度均保持不变；S6：第十二天：收集细胞，其细胞扩增倍数达250倍，细胞纯度大于80％。
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