[发明专利]一种适用于鱼类血细胞快速分类计数的方法及应用

摘要

本发明公开了一种适用于鲫鱼、鲤鱼等常见鱼类的血细胞高通量快速分类分析方法。针对无法去除的有核红细胞在数量和形态两方面干扰白细胞分类计数的问题，利用荧光染料与多通道图像相结合的自动化测量和分析策略，依据细胞内颗粒、细胞核形态及位置等差异，将干扰的红细胞样点与白细胞分开，并划分出淋巴细胞、单核细胞和颗粒细胞等承担重要免疫功能的不同白细胞类群范围，完成自动分析。无法有效去除有核红细胞的难点长期困扰很多种类动物的血象自动化分析，本发明把荧光染料与图像分析相结合，利用多维全景分析仪高通量，高灵敏的测量模块，准确识别出红细胞类群，排除其干扰，为聚焦分析白细胞类群提供了重要的技术支持，有广阔应用前景。

主权项

一种适用于鱼类血细胞快速分类计数的方法，其特征在于按如下的步骤进行：（1）采血和制样微创抽取10‑100微升鲫鱼全血，用含4%多聚甲醛的固定液室温固定5分钟，用DAPI染液重悬细胞，染色5分钟，用PBS重悬细胞；(2)测试和分析1）用70微米细胞筛过滤上述处理后的细胞样品，去除黏连细胞，中速上机检测，收集1‑3万个样点的测量数据；2）将单细胞样点以Area对Intensity作图，根据分区位置及图像提示的细胞形态特征将鲫鱼血细胞清晰地划分为红细胞类群和淋巴细胞，单核细胞以及粒细胞三个白细胞类群；所述的鱼类指的是鲫鱼、鲤鱼具有有核红细胞的鱼类。