[发明专利]基于TaqMan‑MGB探针检测人非结合分枝杆菌和结合分枝杆菌的试剂盒及方法

摘要

本发明公开了一种基于TaqMan‑MGB探针检测人非结合分枝杆菌和结合分枝杆菌的试剂盒及方法。选取分枝杆菌的16S rRNA的基因为目标序列，设计了一对通用PCR 引物，扩增出135bp左右的DNA片段，在这个区域中选定碱基差异较大的部分，设计三种特异性结合结核分枝杆菌、鸟分枝杆菌、胞内分枝杆菌16S rRNA对应基因组序列的探针，并建立了人非结合分枝杆菌和结合分枝杆菌的实时荧光探针定量PCR 检测方法。该检测系统特异性、敏感性、重复性均良好，适合临床AIDS病人早期感染结核杆菌、鸟分枝杆菌‑胞内分枝杆菌复合体的筛查工作。

主权项

用于检测人非结核分枝杆菌和结核分枝杆菌的TaqMan实时荧光定量PCR引物和三条探针，其特征在于，所述引物包括：上游引物All‑F:5’‑GATGCCTGGGAAACTGGGTCTAATA‑3’下游引物All‑R:5’‑CCCGTCGTCGCCTTGGTAGGC‑3’所述探针包括：探针Probe tuber： 5'‑F‑TAGGACCACGGGATGCATG‑Q‑3'探针Probe avium：5'‑F‑TAGGACCTCAAGACGCATGTCTTC‑Q‑3'探针Probe intra： 5'‑F‑TAGGACCTTTAGGCGCATGT‑Q‑3'其中，F 为荧光报告基团，Q 为荧光淬灭基团，人非结核分枝杆菌是指鸟分枝杆菌和胞内分枝杆菌。