[发明专利]一种悬钩子属植物总RNA的快速提取方法

摘要

本发明公开了一种悬钩子属植物总RNA的快速提取方法，取少量悬钩子属植物材料，液氮冷冻下研磨成粉，经过可选的去糖、离心步骤，或直接加入碱性细胞裂解液，进行温浴裂解；完成后通过酚‑弱酸‑氯仿抽提，离心去除蛋白以及绝大部分基因组DNA；上清液中加入醇进行沉淀；离心收集RNA沉淀，经过乙醇洗涤、风干后用DEPC灭菌水溶解，‑80℃保存。与已有CTAB法相比，本发明可以快速提取悬钩子属植物各器官组织总RNA，用时短，在3小时之内可以轻松完成，而已有方法需要12小时以上。为达到去除蛋白质、多糖以及基因组DNA的目的，传统方法需经过2～3轮抽提及2轮以上沉淀，操作步骤繁琐，本方法只进行1轮抽提及1轮沉淀，简化了操作流程。

主权项

1.一种悬钩子属植物总RNA的快速提取方法，其特征在于：它包括以下操作步骤：1)取2ml离心管，向离心管中加入700～1000μl去糖缓冲液，并加入5～15μlβ‑巯基乙醇，于‑20℃预冷5～10min；2)取新鲜植物材料或经液氮速冻后‑80℃保存的植物材料0.1～0.15g，加入0.1g交联聚乙烯基吡咯烷酮，在液氮冷冻条件下研磨成粉状，迅速转移至步骤1)的离心管中，温柔上下颠倒混匀后于冰上静置10min；3)在4℃下按照3200×g离心5～10min；4)彻底去除步骤3)离心所得上清液，向沉淀中加入700～1000μl65℃预热的细胞裂解液，涡旋1min，于55～65℃保温20～30min；5)待步骤4)中的混合液冷却至室温后，按顺序加入细胞裂解液等体积的水饱和酚，1/80‑1/50裂解液体积的pH调节剂，1/5裂解缓冲液体积的氯仿，剧烈震荡2min；6)在4℃下按照16000×g离心5～10min；7)将步骤6)离心所得上清液转入另一离心管，向管中加入上适量核酸沉淀剂，于‑20℃静置30min以上，在4℃下按照16000×g离心10min后弃上清液，保留沉淀；8)将步骤7)离心所得沉淀用体积分数为70～75％乙醇洗涤后室温风干，用DEPC处理水溶解后‑80℃保存。