[发明专利]一种煤层厌氧产甲烷菌群的菌种保藏方法

摘要

本发明属微生物工程技术领域，为解决现有菌种保藏方法无法满足煤层气生成的产甲烷菌群的菌种短期和长期保藏，且保持菌种高产甲烷气的活性，提供一种煤层厌氧产甲烷菌群的菌种保藏方法。步骤为：筛选待保藏菌种，加入到5ml的厌氧管中，然后加入等体积的灭菌甘油/除氧L‑半胱氨酸溶液，将其混匀后保藏；长期保藏：无烟煤块煤、保藏营养液、L‑半胱氨酸及刃天青、菌液按一定比例混合后室温保藏，模拟煤层环境条件，保藏的产甲烷菌群始终保持较高的活性及较稳定的菌群结构，以得到较理想的甲烷产量。不需要超低温设备等，不需特殊设备，方便快捷，适合不同量菌种长短期保藏，经济方便，为生产、试验节约成本。

主权项

一种煤层厌氧产甲烷菌群的菌种保藏方法，其特征在于：包括如下步骤：（1）筛选待保藏菌种：在煤层气产气井排水口采集煤层产出水，对产出水进行产甲烷菌群富集驯化培养，甲烷生成量达到30%以上的菌种培养液作为待保藏菌液；（2）短期保藏：步骤（1）中获得的待保藏菌液加入到5ml的厌氧管中，然后加入等体积的灭菌甘油/除氧L‑半胱氨酸溶液，将其混匀后保藏；（3）长期保藏：100L的保藏罐中加入1/5容积的无烟煤块煤和50L灭菌的保藏营养液，保藏营养液在加入保藏罐前加入100ml浓度为20%的无菌L‑半胱氨酸和50.6mg的刃天青，然后向保藏罐中加入500ml步骤（1）中获得的经富集驯化培养的菌液，保藏罐中持续通入纯N2，2h后间断取样，直至培养基颜色接近无色停止通入N2；室温密闭保藏，每周利用排水集气法收集保藏罐顶空的气体进行气相色谱分析，当气相色谱检测分析甲烷相对含量降低至7%‑15%时，向保藏罐内取出25L的培养液，然后再向罐内加入25L含终浓度为0.04%的L‑半胱氨酸和0.0001%的刃天青的保藏营养液；步骤（2）中所述甘油/L‑半胱氨酸溶液中：甘油的质量分数为30%，L‑半胱氨酸的终浓度为0.04%；步骤（3）中保藏营养液配方为：（g/L）：酵母粉 2g，K2HPO4 2.9g，KH2PO4 1.5g，NH4Cl 1.8g，MgCl2 0.4g。