[发明专利]一种猪繁殖与呼吸综合征病毒Nsp2表达及其ELISA试剂盒

摘要

本发明提供了一种猪繁殖与呼吸综合征病毒Nsp2表达及其ELISA试剂盒，利用通过克隆表达贵州分离株PT株Nsp2重组蛋白，建立了检测Nsp2抗体的间接ELISA方法，此方法快速、有效、敏感、简便，有很好的应用前景。

主权项

一种猪繁殖与呼吸综合征病毒Nsp2表达方法，其特征在于：包括以下步骤：PCR反应体系50L，由10×PCR Buffer 2‑4L、MgCl2(25mM)1‑5L、dNTP(10mM)1‑3L，Nsp2‑1/Nsp2‑2引物各1‑3L、Taq酶0.5‑2L、cDNA适量1‑3L、去离子水补足至50而成；PCR反应参数为：90‑98℃2‑4min预变性，然后进行30个循环，90‑98℃，25‑35s、52‑60℃，25‑35s、68‑76℃40‑60，最后68‑76℃延伸4‑6min；引物为Nsp2‑15′‑CGCGGATCCGACACCTCCTTTGATTGGAAT‑3′，酶切位点BamHⅠ，Nsp2‑25‑CCGGAATTCCGAACCGTTAGGGACATTGTC‑3，酶切位点EcoRⅠ，预扩增长度：606bp。