[发明专利]一种黄曲霉素B1的胶体金免疫检测试剂盒、制备方法及检测方法

摘要

本发明公开了一种黄曲霉素B1的胶体金免疫检测试剂盒、制备方法及检测方法。本发明的黄曲霉素B1的胶体金免疫检测试剂盒包括试剂条和金标微孔，其中，试剂条包括PVC底板、样品垫、硝酸纤维素膜、吸水垫；硝酸纤维素膜上设有检测线和质控线，检测线上包被有黄曲霉素B1‑第二种属动物蛋白偶联物，质控线上包被有抗第二种属动物蛋白的IgG；金标微孔中包被有胶体金标记的第二种属动物蛋白和抗黄曲霉素B1单克隆抗体，利用高度特异的抗体‑抗原特异性结合反应及免疫膜层析技术，通过免疫竞争抑制法来定性检测食品中出现的黄曲霉素B1成分，具有快捷，高效，准确的定性检测效果。

主权项

一种黄曲霉素B1的胶体金免疫检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤：(1)胶体金标记物的制备：用胶体金标记抗黄曲霉素B1单克隆抗体和第二种属动物蛋白；获得胶体金标记物；(2)金标微孔的制备：用pH为7～7.5的PBS缓冲液溶解步骤(1)的胶体金标记物，3～5℃、9000～11000r/min离心15～25min，取沉淀，用含8～12g/L第二种属动物蛋白的PBS缓冲液重悬，获得免疫胶体金溶液，此时胶体金标记物浓度为5～10g/L，取20～30μL免疫胶体金溶液点样于微孔反应板中，预冻3～5h，冻干10～18h，得到金标微孔；(3)检测线和质控线的制备：将黄曲霉素B1‑第二种属动物蛋白偶联物喷在硝酸纤维膜的检测线上，将第二种属动物蛋白的IgG喷在硝酸纤维膜的质控线上，干燥；其中，质控线上包被的抗第二种属动物蛋白的IgG的浓度≥检测线上包被的黄曲霉素B1‑第二种属动物蛋白偶联物的浓度，干燥，制得硝酸纤维膜；(4)试剂条的组装：将样品垫、步骤(3)获得的硝酸纤维膜、吸水垫依次首尾搭接并固定于PVC底板上，其中硝酸纤维膜上的检测线靠近样品垫一端，质控线靠近吸水垫一端，切裁制得试剂条；(5)将试剂条和金标微孔装入盒中，即得黄曲霉素B1的胶体金免疫检测试剂盒。