[发明专利]重组EcoRV限制性内切酶的制备方法在审
| 申请号： | 201710614815.2 | 申请日： | 2017-07-26 |
| 公开（公告）号： | CN107267544A | 公开（公告）日： | 2017-10-20 |
| 发明（设计）人： | 李森;雍德祥;邹刚刚;王方平 | 申请（专利权）人： | 通用生物系统（安徽）有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N9/22 |
| 代理公司： | 北京轻创知识产权代理有限公司11212 | 代理人： | 沈尚林 |
| 地址： | 230000 安徽*** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种重组EcoR V限制性内切酶的制备方法，包括以下步骤(1)表达质粒pCreat Duet‑EcoR V‑甲基化酶的构建；(2)EcoR V与甲基化酶蛋白的诱导表达与鉴定；(3)EcoR V与甲基化酶蛋白的纯化与鉴定。本发明通过重组方式将EcoR V限制性内切酶与甲基化酶克隆到含His标签的pCreat Duet共表达载体中，在低温条件下表达量达到30％。通过Ni柱亲和层析、Superdex200凝胶过滤层析得到高活力的重组EcoR V限制性内切酶，比活与商业化酶相似。 | ||
| 搜索关键词： | 重组 ecorv 限制性 内切酶 制备 方法 | ||
【主权项】：
重组EcoR V限制性内切酶的制备方法，包括以下步骤：(1)表达质粒pCreat Duet‑EcoR V‑甲基化酶的构建；(2)EcoR V与甲基化酶蛋白的诱导表达与鉴定；(3)EcoR V与甲基化酶蛋白的纯化与鉴定。
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