[发明专利]用于幽门螺杆菌个体化基因检测的ARMS‑qPCR方法和试剂盒

摘要

本发明公开一种用于幽门螺杆菌个体化基因检测的ARMS‑qPCR引物组合物，包括引物组合A、引物组合B、引物组合C、引物组合D、引物组合E和引物组合F。本发明还公开了包含上述引物组合物的试剂或试剂盒。进一步又公开了用于幽门螺杆菌个体化基因检测的ARMS‑qPCR方法。本发明基于ARMS‑qPCR平台，针对人CYP2C19基因和幽门螺杆菌的23S rRNA基因和gyrA基因的突变位点设计引物，提高了扩增的特异性；本发明通过特异性的扩增核酸DNA，从而可以对微量的模板进行富集，提高了检测的灵敏度，可以检测Hp基因相关位点0.1‑1％的突变和低至1ng的人CYP2C19基因的样本DNA。

主权项

一种用于幽门螺杆菌个体化基因检测的ARMS‑qPCR引物组合物，其特征在于，所述ARMS‑qPCR引物组合物包括引物组合A、引物组合B、引物组合C、引物组合D、引物组合E和引物组合F，如下述1)、2)、3)、4)、5)和6)所示：1)引物组合A由上游引物*2、上游引物*3、上游引物*17、CYP2C19*2G引物、CYP2C19*3G引物、CYP2C19*17C引物、Taqman探针*2、Taqman探针*3、Taqman探针*17组成；2)引物组合B由上游引物*2、上游引物*3、上游引物*17、CYP2C19*2A引物、CYP2C19*3A引物、CYP2C19*17T引物、Taqman探针*2、Taqman探针*3、Taqman探针*17组成；3)引物组合C由上游引物‑1、A2142G突变型引物、A2143G突变型引物、Taqman探针‑1组成；4)引物组合D由87K‑1引物、87K‑2引物、下游引物‑1、Taqman探针‑2组成；5)引物组合E由91N引物、91G引物、91Y引物、下游引物‑1、Taqman探针‑2组成；6)引物组合F由上游引物‑2、下游引物‑2和外控探针组成；其中，所述上游引物*2的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.1所示；所述CYP2C19*2G引物的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.2所示；所述CYP2C19*2A引物的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.3所示；所述Taqman探针*2的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.4所示；所述上游引物*3的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.5所示；所述CYP2C19*3G引物的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.6所示；所述CYP2C19*3A引物的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.7所示；所述Taqman探针*3的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.8所示；所述上游引物*17的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.9所示；所述CYP2C19*17C引物的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.10所示；所述CYP2C19*17T引物的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.11所示；所述Taqman探针*17的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.12所示；所述上游引物‑1的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.13所示；所述Taqman探针‑1的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.14所示；所述A2142G突变型引物的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.15所示；所述A2143G突变型引物的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.16所示；所述下游引物‑1的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.17所示；所述Taqman探针‑2的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.18所示；所述87K‑1引物的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.19所示；所述87K‑2引物的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.20所示；所述91N引物的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.21所示；所述91G引物的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.22所示；所述91Y引物的核苷酸序列如序列表SEQID NO.23所示；所述上游引物‑2的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.24所示；所述下游引物‑2的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.25所示；和所述外控探针的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.26所示。