[发明专利]一种白及胚状体的诱导培养方法

摘要

本发明公开了一种白及胚状体的诱导培养方法，该方法以白及种子为外植体，先培养出未分化出子叶的原球茎，接着对未分化出子叶的原球茎进行培养，获得分裂能力强、颜色为绿色的胚性组织细胞，最后通过对胚性组织细胞的诱导培养获得白及胚状体，为白及优质种苗的大量培育和快速繁殖提供了一条新途径，可有效地解决当前白及植物资源和种苗资源短缺的问题。

主权项

1.一种白及胚状体的诱导培养方法，其特征在于包括如下步骤：(1)种子的选择及消毒：选取已成熟且果皮已开裂的白及种子，将其进行消毒处理；(2)原球茎的诱导：将消毒后的白及种子接入半固体培养基1/2MS+6‑BA0.1～1.0mg/L+活性炭3.0～5.0g/L+琼脂1.5～3.0g/L中，在培养温度为20～26℃、每天光照10～24小时、光照强度为1500～3000lx的条件下进行原球茎的诱导培养；(3)原球茎胚性组织细胞的培养：选取步骤(2)中未分化出子叶的原球茎，接入固体培养基1/2MS+2iP0.5～2.0mg/L+IAA0.5～1.0mg/L+2,4‑D1.0～3.0mg/L中，在培养温度为15～22℃、每天光照6～12小时、光照强度为800～1200lx的条件下进行培养，培养15～25天继代一次，连续进行2次继代培养，获得原球茎胚性组织细胞；(4)白及胚状体的产生：选取步骤(3)中获得的颜色为绿色的胚性组织细胞，接入固体培养基1/2MS+TDZ1.0～3.0mg/L+NAA0.5～2.0mg/L+酵母提取物100～400mg/L中，在培养温度为22～30℃、每天光照12～24小时、光照强度为2000～3000lx的条件下诱导产生胚状体；上述所有培养基的蔗糖为20～40g/L、pH值为5.8～6.6；其中固体培养基的琼脂为5.0～6.5g/L。