[发明专利]一种组蛋白免疫共沉淀（ChIP）试剂配方

摘要

本发明涉及一种组蛋白免疫共沉淀(ChIP)试剂配方，包含五步，本发明的有益成果为：本发明提供的一种组蛋白免疫共沉淀试剂配方，本发明的方法在经过实例研究后。本发明的配方会综合被检测者基因型和组蛋白信息，通过复杂的步骤保证试剂的质量。

主权项

1.一种组蛋白免疫共沉淀(ChIP)试剂配方，其特征在于，包含以下内容：(1)进行蛋白‑DNA交联和裂解细胞：用终浓度为1％甲醛溶液固定总数为1×107的K562细胞，室温下放置10min，甘氨酸溶液中止反应；用预冷的PBS洗涤细胞两次，离心去上清后加入1ml含蛋白酶抑制剂的SDS裂解液裂解细胞；(2)超声断裂染色质：按优化好的条件(100W，每次超声10s，共5次，间隔30s)断裂细胞裂解液中的染色质，4℃下离心后保留上清；(3)免疫共沉淀：超声处理后的溶液中加入蛋白G‑琼脂糖小珠进行预清除，离心后吸取1％(v/v)上清留作Input溶液在剩余的上清中加入免疫共沉淀抗体，包括阳性对照抗体(anti‑RNA Polymerase II，1.0μg/管)、阴性对照抗体(normal mouse Ig G，1.0μg/管)和目的抗体(依抗体说明书推荐量：抗ac H3抗体10μg/管，抗ac H4抗体3μg/管)，在4℃摇床上孵育过夜，次日溶液中加入蛋白G‑琼脂糖小珠吸附免疫沉淀复合物，短暂离心后去上清，顺次用低盐、高盐、氯化锂和TE缓冲液清洗蛋白G‑琼脂糖小珠；(4)免疫沉淀复合物洗脱：用洗脱缓冲液洗脱免疫沉淀复合物，同时在装有Input溶液的管中加入相同体积的洗脱缓冲液；(5)蛋白‑DNA结合物解交联，释放DNA：加入5mol/L Na Cl溶液，65℃水浴孵育4‑5h或过夜；(6)用DNA纯化柱回收DNA。