[发明专利]用于原位检测核酸的超灵敏方法

摘要

本文公开了基于方法和常规ISH信号放大方法的组合的用于原位检测一种或多种目标核酸的方法。这种新方法产生了高信号强度并同时保持了信号放大的低背景噪声。可以一致地重复产生结果并且所述方法能够容易地用于常规临床诊断使用。此外，本发明涉及用于一种或多种目标核酸的灵敏检测的试剂盒，其包含测定和通用ISH信号放大测定的组分。

主权项

检测至少一种目标核酸的方法，所述方法包括：(a)提供包含或怀疑包含所述目标核酸的样品；(b)提供能够杂交至所述目标核酸的至少一组两个或更多个捕获探针；(c)提供能够杂交至所述两个或更多个捕获探针的组的信号产生多聚体，其中所述信号产生多聚体包含标记探针；(d)提供能够结合至所述标记探针的信号放大探针，其中所述信号放大探针包含标记物，其中，所述信号放大探针包含：能够结合至所述标记探针的生物素分子，能够结合至所述生物素分子的抗生物素蛋白/抗生蛋白链菌素分子，以及结合至辣根过氧化物酶(HRP)、碱性磷酸酶(AP)或荧光团并且能够结合于所述抗生物素蛋白/抗生蛋白链菌素分子的另外的生物素分子；(e)将所述目标核酸杂交至所述两个或更多个捕获探针的组；(f)将所述信号产生多聚体捕获至所述两个或更多个捕获探针的组并借此将所述信号产生多聚体捕获至所述目标核酸；(g)将所述信号放大探针捕获至所述标记探针并借此将所述信号放大探针捕获至所述信号产生多聚体；和(h)检测所述标记物的存在、不存在或量。