[发明专利]一种检测水稻豇豆胰蛋白酶抑制剂的人工微球

摘要

本发明涉及一种检测水稻豇豆胰蛋白酶抑制剂的人工微球，检测豇豆胰蛋白酶抑制剂的人工微球，由抗CpTI蛋白多克隆抗体包被，微球颗粒200nm，表面载基团为羧基。是用下述方法制备的，根据原核细胞表达的优先密码子重新修饰并构建全长CpTI基因表达序列，构建细菌融合表达载体，再通过限制酶切割插入谷胱甘肽‑S‑转移酶(GST)基因融合表达载体中进行细菌表达，用亲合层析柱纯化得GST‑CpTI融合蛋白，再将佐剂溶合抗原后免疫小鼠，经分离纯化得抗CpTI多克隆抗体，抗体通过化学偶联法偶联活化后得检测CpTI蛋白的人工微球。用于检测+最低检测限为CpTI融合蛋白0.2μg/ml，相关系数R2＝0.67。

主权项

一种检测水稻豇豆胰蛋白酶抑制剂的人工微球，其特征在于：由抗CpTI蛋白多克隆抗体包被，微球颗粒大小200nm，表面载基团为羧基；检测豇豆胰蛋白酶抑制剂的人工微球是由下述方法制备的，制备的具体步骤如下：1)根据原核细胞表达的优先密码子重新修饰并构建全长CpTI基因表达序列；2)构建细菌融合表达载体pGEX‑4T‑2‑CpTI，将CpTI基因片段通过限制酶切割插入谷胱甘肽‑S‑转移酶基因融合表达载体中；所述构建融合表达载体体pGEX‑4T‑2‑CpTI是pGEX‑4T‑2‑CpTI3；3)对表达载体进行细菌表达后，利用亲合层析柱纯化获得GST‑CpTI融合蛋白；所述亲合层析柱为Glutathione Sepharose 4B；4)将佐剂溶合抗原后免疫小鼠，经分离纯化得到鼠抗CpTI多克隆抗体；5)将步骤4)所得鼠抗CpTI多克隆抗体，通过羧基‑氨基化学偶联法偶联活化微球，得到检测CpTI蛋白的人工微球；所述偶联活化微球是首先用活化剂碳化二亚胺活化微球，然后加入保护剂Sulfo‑NHS使微球形成稳定的活泼酯中间体。