[发明专利]基于全自动在线固相萃取‑超高效液相色谱‑线性离子阱串联质谱测定水中藻类毒素的方法

摘要

本发明公开了一种基于全自动在线固相萃取‑超高效液相色谱‑线性离子阱串联质谱测定水中藻类毒素的方法，它通过配制样品溶液、线性溶液、空白溶液及加标回收试验样品溶液，利用在线固相萃取，实现水中藻类毒素在线富集的目的，大大提高了检测效率，降低了实验人员的劳动强度，解决了传统分析过程中存在的前处理方法操作繁琐、样品检测周期长、人工预处理的重现性难以保证等问题。同时结合线性离子阱串联质谱法和内标法，保证了水中痕量多种藻类毒素同时分析时的准确定量以及精确定性，提升了藻类毒素的检测能力，为政府行政部门的分析监管提供先进技术支撑。

主权项

基于全自动在线固相萃取‑超高效液相色谱‑线性离子阱串联质谱测定水中藻类毒素的方法，其特征在于包括如下步骤：1）混合标准品工作溶液的配制：分别精密移取0.5mL 5μg/mL的各藻类毒素储备液至5mL容量瓶中，用甲醇定容，再精密移取1.0 mL混合液至另一10 mL容量瓶中，用甲醇定容，制成50 ng/mL的混合标准品工作溶液，于‑18℃下保存备用；2）同位素内标工作溶液的配制：精密移取0.1 mL 10 μg/mL的内标储备液至10 mL容量瓶中，用甲醇定容，再精密移取0.5 mL定容的容量瓶中内标储备液至5 mL容量瓶中，用甲醇定容，制得10 ng/mL的内标工作溶液，于‑18℃下保存备用；3）线性溶液的制备：用超纯水稀释藻类毒素浓度在0.02‑8.0 ng/mL范围内，内标浓度均为0.5 ng/mL的线性标准溶液，供色谱测定；4）加标回收试验样品溶液的制备：取不含藻类毒素的样品，置50 mL高速离心管中，精密加入不同量的步骤1）制得的混合标准品工作溶液，获得检出限为0.005 ng/mL、定量限为0.015 ng/mL、低、中、高不同水平浓度分别为0.02 ng/mL、0.1 ng/mL、1.0 ng/mL的加标试验样品，再向该加标试验样品中精密加入步骤2）同位素内标工作溶液，使制得加标回收试验样品溶液内标浓度均为0.5 ng/mL，过膜后，供色谱测定；5）用全自动在线固相萃取‑超高效液相色谱‑线性离子阱串联质谱法测定样品溶液、线性溶液、空白溶液及加标回收试验样品溶液：a 测定：进样过程：由程序控制使自动进样器实现200 μL连续2次进样，吸取样品溶液、线性溶液及加标回收试验样品溶液注入色谱仪中，以在线固相萃取‑超高效液相色谱‑线性离子阱串联质谱法，测定样品溶液中的目标化合物峰面积、内标化合物峰面积；线性溶液中目标化合物峰面积、内标化合物峰面积；加标回收试验样品溶液中目标化合物峰面积、内标化合物峰面积，标准工作溶液及试样溶液中待测组分的响应值均应在监测器的线性范围之内；b 曲线方程斜率、曲线方程截距的计算以线性溶液中的目标化合物峰面积比内标化合物峰面积定量，得到曲线方程A=aC+b，式中C为溶液中目标化合物残留量，单位为 ng/mL；A为目标化合物峰面积比内标化合物峰面积比；a为曲线方程斜率；b为曲线方程截距，根据线性溶液的浓度、测出的线性溶液中目标化合物峰面积、内标化合物峰面积，采用拟合法，计算得出a和b；c 结果分析：样品溶液中未知组份的保留时间分别与线性溶液中的目标化合物在同一色谱柱上的保留时间相比较，样品中某组份包括定量及定性离子的保留时间与线性溶液中某一藻类毒素的保留时间的绝对值在0.05min内，认定为该种藻类毒素，样品溶液中的目标化合物残留量浓度C，其单位为ng/mL，计算公式如下：C=(A‑b)/a式中：A为样品溶液中的目标化合物峰面积比内标化合物峰面积；a和b由步骤b计算得到；d结果验证：加标回收试验样品溶液按步骤c计算出实际的目标化合物残留量浓度C，与其理论的目标化合物残留量浓度C相比较，计算其平均回收率，平均回收率为80‑120%，证明该检测方法可行；e目标物确证：利用线性离子阱功能下，选择增强子离子模式获得标准物质的子离子高增强二级质谱图EPI并编辑谱库，将对应的目标物名称、相对分子量、CAS号以及化学结构图等补充完整，对样品中低浓度藻类毒素进行确证时，可获得样品中藻类毒素的EPI谱图后，进行定性谱库检索，依据两者匹配度进行确证。