[发明专利]一种标记特异性高亲和力重组抗体的荧光微球及其应用

摘要

本发明属于生物医药领域，具体而言涉及一种标记特异性高亲和力重组抗体的荧光微球及其制备方法与应用，特别是一种快速定量检测人尿样或血样中KIM‑1、NGAL、IGFBP7、TIMP‑2、IL‑18、PCT、cTnI的即插荧光检测卡。本发明提供的标记特异性高亲和力重组抗体的荧光微球的方法，具体为先对荧光微球活化；然后将活化的荧光微球放入装有磷酸缓冲液的透析袋中得到透析后的荧光微球液；加入氨基聚乙二醇羧基，二次透析后的荧光微球液再进行进一步活化，并用重组抗体标记，反应后离心，清洗沉淀，再重悬沉淀。本发明提供的荧光微球，能够显著提高免疫荧光的反应下线，使得制得的检测卡比传统方法灵敏度提高10‑100倍,检测范围也得到显著提升。

主权项

1.一种标记特异性高亲和力抗体的荧光微球的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1用1‑(3‑二甲基氨基丙基)‑3乙基碳二亚胺溶液和N‑羟基琥珀酰亚胺溶液分别对荧光微球液进行活化，得到荧光微球活化混合物；S2将步骤S1中的荧光微球活化混合物放入透析袋中，在磷酸盐缓冲液中透析除去多余的1‑(3‑二甲基氨基丙基)‑3乙基碳二亚胺和N‑羟基琥珀酰亚胺，得到透析后的荧光微球液；S3将步骤S2透析后的荧光微球液里加入氨基聚乙二醇羧基，37℃搅拌反应1‑3小时，在弱酸性N‑吗啉乙磺酸缓冲溶液中进行第二次透析，除去多余的氨基聚乙二醇羧基，得到二次透析后的荧光微球液；所述氨基聚乙二醇羧基分子量为1000～5000 Da；S4将步骤S3二次透析后的荧光微球液通过加入1‑(3‑二甲基氨基丙基)‑3乙基碳二亚胺再次活化，再加入抗体于2‑8℃下反应8‑12小时，加入牛血清白蛋白封闭，离心沉淀，再将沉淀用磷酸盐缓冲液PBS重悬，离心沉淀，用荧光微球复溶液重悬，即制得标记特异性高亲和力抗体的荧光微球；所述荧光微球复溶液为含有0.1‑1.5wt％明胶或BSA、0.01‑1wt％曲拉通X‑100、0.05‑0.1wt％叠氮钠、0.01‑0.2mol/L pH 6.5‑8.5磷酸盐缓冲液。