[发明专利]一种无烟气烟草制品中烟碱和降烟碱手性分析合相色谱‑串联质谱法

摘要

本发明公开了一种无烟气烟草制品中烟碱和降烟碱手性分析合相色谱‑串联质谱法。其特征在于将无烟气烟草制品样品干燥、粉碎和过筛，样品经过氢氧化钠溶液浸润后，采用正己烷/甲醇溶液萃取，萃取液经基质分散固相萃取净化后，使用两根手性柱串联‑合相色谱串联质谱法分析，采用峰面积归一化法定量检测无烟气烟草制品中S‑(‑)‑烟碱，R‑(+)‑烟碱，S‑(‑)‑降烟碱和R‑(+)‑降烟碱的比例。本方法提供的检测方法，样品萃取净化方法简单高效，可降低样品液对色谱柱的污染，合相色谱串联质谱法检测方法灵敏度高，特异性好，可排除假阳性，分析时间短，能够满足大批量无烟气烟草制品样品中烟碱和降烟碱的手性分析。

主权项

一种无烟气烟草制品中烟碱和降烟碱手性分析合相色谱‑串联质谱法，其特征在于：将无烟气烟草制品样品干燥、粉碎和过筛，样品经过氢氧化钠溶液浸润后，采用正己烷/甲醇溶液萃取，萃取液经基质分散固相萃取净化后，使用手性柱‑合相色谱串联质谱分析，采用峰面积归一化法定量检测无烟气烟草制品中S‑(‑)‑烟碱，R‑(+)‑烟碱，S‑(‑)‑降烟碱和R‑(+)‑降烟碱的比例，具体步骤如下：1). 标准溶液的配制：称取100.0 mg的S‑(‑)‑烟碱，R‑(+)‑烟碱，S‑(‑)‑降烟碱和R‑(+)‑降烟碱标准品，用甲醇溶液稀释定容到50 mL棕色容量瓶中，配制成浓度为2.0 mg/mL的标准储备液；利用标准储备液稀释配制S‑(‑)‑烟碱，R‑(+)‑烟碱，S‑(‑)‑降烟碱和R‑(+)‑降烟碱浓度为100 μg/mL的混合标准溶液；2).无烟气烟草制品样品的混匀：将无烟气烟草制品样品置于40 oC烘箱中，1小时后将无烟气烟草制品取出，粉碎后过0.45毫米孔径标准筛；3). 无烟气烟草制品样品的萃取：称取0.3 g已粉碎的样品于15 mL具塞离心管中，加入2.0 mL 5% 的氢氧化钠溶液，涡旋1 min混匀后静置10 min浸润样品；取10 mL正己烷/甲醇溶液到上述具塞离心管中，并于旋涡混合器上以4000 rpm速度振荡30 min；4). 萃取液的净化：取1.5 mL萃取上清液于2 mL内含有基质分散固相萃取材料的净化离心管中，于旋涡混合器上以4000 rpm振荡2 min，以10000 rpm离心1 min，取上清液过0.45 μm有机相滤膜后进液相分析；5).串联手性柱‑合相色谱串联质谱法条件：分析柱1为Trefoil CEL1柱，柱长 150 mm ，内径3.0 mm ，固定相粒径2.5 µm，分析柱2为Chiralcel OD‑H液相色谱柱，柱长 250 mm ，内径4.6 mm ，固定相粒径5 µm；流动相A为：CO2，流动相B：含0.05%异丙胺的甲醇；流速为1.0 mL/min；梯度洗脱条件为：0.0 min，97% A；0.5 min，97% A；8.0 min，92% A；12.0 min，92% A； 30.0 min，90% A；柱温40 ℃；进样室温度：10 ℃；进样体积2 μL；背压：1600 psi；ISM补偿流路流动相为含0.1%甲酸的甲醇，流速为0.3 mL/min，分析时间总计30 min；质谱条件：离子源：电喷雾源，扫描方式为正离子扫描，离子源温度为300 ℃，电喷雾电压为5000 V，雾化气压力为40 psi；检测方式：多反应监测（MRM）；通过对峰面积进行归一化定量R‑(+)‑烟碱占总烟碱的比例，S‑(‑)‑降烟碱占总降烟碱的比例。