[发明专利]血液中未知毒物的液相色谱-质谱筛查方法

摘要

本发明公开了一种血液中未知毒物的液相色谱‑质谱筛查方法：取待检测血液样品，加入乙腈沉淀蛋白，振荡，离心，取上清液，0.22μm微孔有机滤膜过滤，然后进行LC‑MS/MS分析，根据分析结果判断待检测血液样品中是否含有毒物成分；所用仪器选自AB公司ultraLC 100‑XL‑4000Q TRAP液质联用仪，或Agilent 1100液相色谱‑AB 3200 QTRAP三重串联四极杆质谱仪。本发明建立了不同类别毒物的检测方法，检测快速、准确，给出了常见毒物的检出限，确保各类目标物的高灵敏有效检验，为阴性检验结果提供了科学的数据支撑，继而为相关的临床诊断、抢救及刑事侦查、诉讼提供有力的科学依据。

主权项

1.一种血液中未知毒物的液相色谱‑质谱筛查方法，其特征在于：取待检测血液样品，加入乙腈沉淀蛋白，振荡，离心，取上清液，0.22μm微孔有机滤膜过滤，然后进行LC‑MS/MS分析，根据分析结果判断待检测血液样品中是否含有毒物成分；所用仪器选自AB公司ultraLC 100‑XL‑4000Q TRAP液质联用仪，或Agilent 1100液相色谱‑AB 3200 QTRAP三重串联四极杆质谱仪；当采用AB公司ultraLC 100‑XL‑4000Q TRAP液质联用仪时，质谱条件为：a)离子源：电喷雾电离；b)扫描方式：多反应监测模式；c)气帘气：20psi；d)碰撞气：Medium；e)喷雾电压：5500/‑4500V；f)温度：500℃；g)喷雾气：50psi；h)辅助加热气：50psi；i)接口加热：on；j)碰撞室入口电压：10V；k)碰撞室出口电压：6V；l)去簇电压；液相色谱分析条件如下：a)目标检测物为有机磷1及氨基甲酸酯类药物时：色谱柱：Waters BEH C18 1.7μm2.1×50mm Column，流速：0.3mL/min；进样量：2μL，流动相A为0.1％甲酸、5mM乙酸铵水溶液，流动相B为甲醇；b)目标检测物为有机磷2时：色谱柱：Waters BEH C18 1.7μm 2.1×50mm Column，流速：0.3mL/min；进样量：2μL，流动相A为5mM乙酸铵水溶液，流动相B为甲醇；c)目标检测物为苯并杂氮卓类、吩噻嗪类及其它正离子分析模式药物时：色谱柱：Waters BEH C18 1.7μm 2.1×50mm Column，流速：0.3mL/min；进样量：2μL，流动相A为0.1％甲酸、5mM乙酸铵水溶液，流动相B为甲醇；d)目标检测物为巴比妥类及其他负离子分析模式药物时：色谱柱：Waters BEH C18 1.7μm2.1×50mm Column，流速：0.3mL/min；进样量：2μL，流动相A为水，流动相B为甲醇；e)目标检测物为鼠药时：色谱柱：Waters BEH C18 1.7μm 2.1×50mm Column，流速：0.3mL/min；进样量：2μL，流动相A为0.1％甲酸水溶液，流动相B为甲醇；f)目标检测物为季铵盐类时：色谱柱：HILIC 2.7μm 2.1×50mm Column，流速：1.0mL/min；进样量：5μL，流动相A为0.1％甲酸、5mM乙酸铵水溶液，流动相B为乙腈；g)目标检测物为毒品类时：色谱柱：Waters BEH C18 1.7μm 2.1×50mm Column，流速：0.3mL/min；进样量：2μL，流动相A为0.1％甲酸水溶液，流动相B为乙腈；当采用Agilent 1100液相色谱‑AB 3200 QTRAP三重串联四极杆质谱仪时，质谱条件为：a)喷雾电压:5500V/－4500V；b)气帘气:25psi；c)雾化气:65psi；d)辅助加热气:55psi；e)辅助气温度:650℃；f)离子驻留时间：70ms；g)扫描模式：MRM；液相色谱条件如下：色谱柱：Eclipse XDB‑C18，4.6mm×150mm,5μm，流动相流速设置为1.0mL/min；液相色谱洗脱条件：a)目标检测物为苯并杂氮卓类、吩噻嗪类、氨基甲酸酯类、有机磷类1及其它正离子分析模式药物时：流动相：A：甲醇；B：5mM NH₄AC水溶液；C：0.1％甲酸水溶液；b)目标检测物为有机磷类2时：流动相：A：甲醇；B：5mM NH₄AC水溶液；c)目标检测物为巴比妥类及其它负离子分析模式药物时：流动相：A：甲醇；B：水；d)目标检测物为鼠药类时：流动相：A：甲醇；B：0.1％甲酸水溶液；e)目标检测物为毒品1时：分析条件同a)项所示；f)目标检测物为毒品2时：流动相：A：乙腈；B：5mM NH₄AC水溶液；C：0.1％甲酸水溶液；g)目标检测物为毒品3时：流动相：A：乙腈；B：0.1％甲酸水溶液；以上所涉及的目标检测物的分类如下：(1)有机磷1：杀扑磷、久效磷、氧化乐果、甲基对硫磷、乙酰甲胺磷、毒死蜱、伏杀硫磷、治螟磷、马拉硫磷、甲基异柳磷、敌敌畏、甲胺磷、乐果；(2)有机磷2：甲拌磷、对硫磷、特丁磷、辛硫磷；(3)氨基甲酸酯类药物：抗蚜威、克百威、灭多威、速灭威、异丙威、涕灭威、涕灭威亚砜、涕灭威砜；(4)苯并杂氮卓类药物：安定、阿普唑仑、劳拉西泮、艾司唑仑、三唑仑、氯氮平、利眠宁、卡马西平、马来酸咪达唑仑、奥沙西泮、氯硝安定、7‑氨基氯硝安定；(5)巴比妥类药物：巴比妥、苯巴比妥、异戊巴比妥、烯丙异丙基巴比妥、速可眠；(6)吩噻嗪类药物：氯丙嗪、盐酸异丙嗪、丙咪嗪、三氟拉嗪、奋乃静；(7)季铵盐类药物：百草枯；(8)鼠药：溴敌隆、溴鼠灵；(9)毒品：毒品1：大麻二酚、四氢大麻酚；毒品2：甲卡西酮、可卡因、吗啡和可待因及它们的衍生物；毒品3：卡西酮、苯丙胺；(10)其他药物：a：正离子分析模式药物：氨基比林、佐匹克隆、多虑平、阿米替林、眠尔通、盐酸哌替啶、安替比林、咖啡因、扑尔敏、太尔登、醋酸泼尼松、枸橼酸芬太尼、曲安奈德、盐酸地芬诺酯、布洛芬、哈西奈德、SKF₅₂₅；b：负离子分析模式药物：苯妥英、安乃近。