[发明专利]一种人工诱导多能干细胞分化为造血干细胞的方法在审
| 申请号： | 201710728690.6 | 申请日： | 2017-08-23 |
| 公开（公告）号： | CN107287159A | 公开（公告）日： | 2017-10-24 |
| 发明（设计）人： | 张正亮 | 申请（专利权）人： | 安徽惠恩生物科技股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0789 | 分类号： | C12N5/0789 |
| 代理公司： | 北京力量专利代理事务所(特殊普通合伙)11504 | 代理人： | 毛雨田 |
| 地址： | 230000 安徽省*** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种人工诱导多能干细胞分化为造血干细胞的方法，该方法具体步骤如下取人体胚胎干细胞接种在BG02培养基上；细胞培养至汇合状态后，消化后接种于新的饲养层细胞上；制备单细胞悬液，将细胞悬液接种至六孔培养板中，培养3‑4d对胚胎干细胞进行预诱导；将细胞种至0.9％甲基纤维素的半固体培养基中，每天更换培养液，细胞培养至汇合状态后，消化传代，接种于新的饲养层细胞上，得到造血干细胞。本发明提供了一种胚胎干细胞通过人工诱导分化为造血干细胞的方法，胚胎干细胞具有非特异性，能够进行长期的增殖和自我更新，同时还具有分化能力，所述制备方法为大量获取造血干细胞提供了一种有效途径，对临床治疗中造血干细胞的移植具有重要意义。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 人工 诱导 多能 干细胞 化为 造血 方法 | ||
【主权项】：
一种人工诱导多能干细胞分化为造血干细胞的方法，其特征在于，该方法具体步骤如下：S1、取人体胚胎干细胞接种在BG02培养基上；S2、培养过程中每天更换培养液，细胞培养至汇合状态后，消化后接种于新的饲养层细胞上，传代比例1:5‑6；S3、取生长良好的胚胎干细胞，制备单细胞悬液，将细胞悬液接种至六孔培养板中，六孔培养板中加入DMEM/F12培养液，培养3‑4d对胚胎干细胞进行预诱导；S4、将S3中预诱导结束的细胞PBS反复吹打，离心沉淀后加入胰蛋白酶消化，之后3‑4×107/L的细胞密度接种至0.9％甲基纤维素的半固体培养基中，每天更换培养液，细胞培养至汇合状态后，37℃条件下加入2‑3mg/ml胶原酶Ⅳ进行消化传代，接种于新的饲养层细胞上，传代比例1:5，得到造血干细胞。
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