[发明专利]一种同时测定烟草及烟草制品中12种生物碱的方法

摘要

本发明涉及一种同时测定烟草及烟草制品中12种生物碱的方法，属于理化分析技术领域。该方法包括以下步骤（1）采用5%的氢氧化钠水溶液将烟草中的生物碱游离出来；（2）使用二氯甲烷/甲醇混合溶液（V二氯甲烷/V甲醇=41）作为萃取剂进行液液振荡萃取；（3）室温静置后，取下层有机相转移到色谱分析瓶中进行GC‑MS分析。本发明中12种烟草生物碱的加标回收率在83.36%~111.88%之间，精密度不高于7.93%，方法检出限在0.025~0.620 μg/g，具有操作简便、通量高、灵敏度高、回收率及重复性好等优点。

主权项

一种同时测定烟草及烟草制品中12种生物碱的方法，所述12种生物碱分别为：烟碱、N‑甲基假木贼碱、降烟碱、麦斯明、假木贼碱、β‑二烯烟碱、新烟草碱、2,3’‑联吡啶、β‑二烯降烟碱、可替宁、哈尔碱、烟台林，其特征在于：使用5%的氢氧化钠溶液将目标样品中的生物碱游离出来，再用二氯甲烷/甲醇混合溶液进行液液萃取，以气相色谱‑质谱联用法进行测定，内标法定量，具体包括以下步骤：1）标准工作溶液的制备分别制备具有5级浓度梯度的烟碱标准工作溶液，具有6级浓度梯度的降烟碱标准工作溶液及具有12级浓度梯度的其他10种次要生物碱标准工作溶液，其中，烟碱的定量采用喹啉作为内标，降烟碱的定量采用降烟碱‑2,4,5,6‑d4作为内标，其它次要生物碱的定量采用2,2’‑联吡啶‑d8作为内标；2）样品前处理准确称取0.1‑0.5 g烟草样品于15 mL塑料离心管中，再分别加入内标溶液和5%氢氧化钠溶液，震荡混匀后，静置20 min；然后加入5‑10 mL二氯甲烷/甲醇混合溶液，加盖密封后置于涡旋振荡器中，以500‑2500 rpm的速度涡旋振荡提取40‑60 min；以10000 rpm的速度离心5 min后，取下层有机相转移到色谱分析瓶中进行GC‑MS分析，3）气相色谱‑质谱分析利用气相色谱仪配备质谱检测器对所制待测样品溶液和标准工作溶液进行分析，得到相关色谱图，其中，烟碱和11种次要生物碱分析分别采用两种不同的分析步骤，其分析条件为：色谱柱为DB‑35MS毛细管色谱柱，规格：30 m × 0.25 mm × 0.25 μm；进样口温度：250 ℃；进样量：1 μL；载气：氦气，纯度≥99.999%，恒流模式，流速：1.0 mL/min；采用两针进样，分别按照两组升温程序运行：烟碱柱升温程序：分流进样（分流比：100:1）；溶剂延迟：5 min；升温程序：初始温度80 ℃，保持1 min，以20 ℃/min的速率至200 ℃，再以40 ℃/min的速率至250 ℃，保持5 min，运行总时间为13.25 min；次要生物碱碱柱升温程序：分流进样（分流比：10:1）；溶剂延迟：12 min；升温程序：初始温度80 ℃，保持1 min，以8 ℃/min的速率至250 ℃，保持1 min，再以40 ℃/min的速率至280 ℃，保持5 min，运行总时间为29 min；电离方式：电子轰击源（EI）；电离能量：70 eV；传输线温度：280 ℃；离子源温度：250 ℃；扫描离子范围：80～250 amu；质谱扫描方式：选择离子监视方式（SIM）扫描，目标物及内标的保留时间、定量及定性选择离子参数如下表1所示4）标准曲线绘制及结果计算。