[发明专利]一种多环芳烃污染土壤中外源降解菌的施加方法在审
| 申请号： | 201710734934.1 | 申请日： | 2017-08-24 |
| 公开（公告）号： | CN107299150A | 公开（公告）日： | 2017-10-27 |
| 发明（设计）人： | 张闻;王加宁;高永超;黄玉杰;季蕾;郭书海;陈贯虹;郑立稳;王磊磊 | 申请（专利权）人： | 山东省科学院生态研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12Q1/04;B09C1/10;C12R1/38 |
| 代理公司： | 济南金迪知识产权代理有限公司37219 | 代理人： | 朱家富 |
| 地址： | 250014 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种多环芳烃污染土壤中外源降解菌的施加方法，步骤如下(1)采集土壤样品，测定含水率，‑20℃以下保存；(2)提取样品中的基因组DNA，制得DNA模板；(3)对DNA模板进行实时荧光定量PCR扩增；(4)投加外源假单胞菌PPZ‑1，检测外源降解菌的数量及菲残留量，补加外源假单胞菌PPZ‑1，直至菲残留量达到处理要求。本发明首次通过利用实时荧光定量PCR的方法特异性监测土壤中外源多环芳烃降解菌假单胞菌PPZ‑1，并通过控制土壤中的外源多环芳烃降解菌的菌量实现快速降解土壤中多环芳烃的目的。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 芳烃 污染 土壤 中外 降解 施加 方法 | ||
【主权项】：
一种多环芳烃污染土壤中外源降解菌的施加方法，其特征在于，步骤如下：(1)采集土壤样品，测定含水率，‑20℃以下保存；(2)提取样品中的基因组DNA，制得DNA模板；(3)对步骤(2)制得的DNA模板进行实时荧光定量PCR扩增，上游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，下游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，然后根据标准曲线，计算目标菌数量；所述标准曲线如下：Y＝‑3.365X+37.624；其中：R2＝0.9999，Y为实时荧光定量PCR反应的Ct值，X为菌的标准质粒拷贝数对数值；(4)调整土壤含水率至20‑50％，疏松土壤，根据土壤多环芳烃污染物含量及土壤营养元素含量，添加氮磷肥料，调节污染土壤的碳、氮、磷的摩尔比为(100～120)：(5～10)：1，投加外源假单胞菌(Psedomonassp.)PPZ‑1的数量至109CFU/g土，隔周翻搅一次，维持土壤含水率20～50％，每周检测外源降解菌的数量及多环芳烃残留量，当外源降解菌数量低于107CFU/g土时，补加外源假单胞菌(Psedomonassp.)PPZ‑1的数量至109CFU/g土，直至多环芳烃残留量达到处理要求。
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