[发明专利]一种基于LC-MS-MS技术的体内蛋白质营养的评价方法

摘要

本发明公开了一种基于LC‑MS‑MS技术的体内蛋白质营养的评价方法。本发明评价方法，包含以下步骤：(1)采集不同肠段内容物，提取分离蛋白成分；(2)测定蛋白浓度；(3)质谱前处理：包括进行全蛋白溶液的消化和脱盐；(4)LC‑MS‑MS分析；(5)数据库搜索；(6)数据处理。本发明将蛋白质组学技术用来鉴定不同肠段内容中蛋白质及其消化产物，在此基础上，可以判断出不同肠段内容物蛋白质及其内容物的来源，通过生物信息学分析，可以更深入了解差异蛋白在机体内部的功能，其中与蛋白质消化代谢有关的酶的基因表达可能存在不同，为进一步科学评价蛋白质的消化利用提供科学依据。

主权项

一种基于LC‑MS‑MS技术的体内蛋白质营养的评价方法，其特征在于包含以下步骤：(1)采集不同肠段内容物，提取分离蛋白成分；(2)测定蛋白浓度；(3)质谱前处理：包括进行全蛋白溶液的消化和脱盐吹干；(4)LC‑MS‑MS分析：将上一步经消化和脱盐吹干的样品通过使用纳米液质系统的反相液相色谱得到的肽段产物，并通过使用LTQ‑Orbitrap质谱仪的串联质谱法通过纳升离子源进行分析；(5)数据库搜索：使用MaxQuant_1.5.8.3软件分别搜索来自30个单独的鸟枪法LC‑MS/MS运行的原始光谱文件；(6)数据处理：包括通过对各个肠段内容物的蛋白进行三方面搜库，具体搜索来源为膳食蛋白，宿主和肠道微生物的蛋白库，对三个来源的蛋白数据进行分析，能够明确知道以下信息：①膳食蛋白在体内的消化情况，在哪个肠段转变成哪种物质，以及鉴定出的蛋白或肽段种类和丰度；②宿主在膳食蛋白的诱导下分泌出了哪些蛋白，参与哪些生物学进程，对机体健康有何种作用；③肠道微生物会对进入大肠的膳食蛋白进行响应，从而代谢蛋白分泌微生物蛋白。