[发明专利]一种基于PiggyBac载体的CD‑19‑CAR‑T系统构建方法在审
| 申请号： | 201710748678.1 | 申请日： | 2017-08-28 |
| 公开（公告）号： | CN107529550A | 公开（公告）日： | 2018-01-02 |
| 发明（设计）人： | 马晓冬;刘明;黄行许 | 申请（专利权）人： | 马晓冬 |
| 主分类号： | C12N15/63 | 分类号： | C12N15/63;C12N15/62 |
| 代理公司： | 北京科家知识产权代理事务所(普通合伙)11427 | 代理人： | 陈娟 |
| 地址： | 510631 广东省广州市*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种基于PiggyBac载体的CD‑19‑CAR‑T系统构建方法根据PiggyBac载体的特性，查找CD19的单链抗体可变区(scFv)基因片段序列，并设计合成包括来源于CD19抗原特异性的抗体重链和轻链可变区片段由中间连接分子相连组成的单链抗体scFv，中间片段由CD8来源的连接和穿膜片段组成，膜内片段由传递信号的效应分子如CD3ζ组成，将合成的目的基因连接到pMD 18‑T simple vector上，采用酶切、连接和转化的方法，将目的基因连接到PiggyBac载体上，得到目的基因。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 基于 piggybac 载体 cd 19 car 系统 构建 方法 | ||
【主权项】：
一种基于PiggyBac载体的CD‑19‑CAR‑T系统构建方法：其特征在于，根据PiggyBac载体的的特性，查找CD19的单链抗体可变区(scFv)基因片段序列，并设计合成包括来源于CD19抗原特异性的抗体重链和轻链可变区片段由中间连接分子相连组成的单链抗体scFv，中间片段由CD8来源的连接和穿膜片段组成，膜内片段由传递信号的效应分子如CD3ζ组成，将合成的目的基因连接到pMD 18‑Tsimple vector上，采用酶切、连接和转化的方法，将目的基因连接到PiggyBac载体上，并进行测序来检测合成的目的基因序列是否正确，接着将连接产物转入到大肠杆菌感受态TOP10中，使含有目的片段的PiggyBac载体在大肠杆菌中大量扩增，扩增后得到目的基因。
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