[发明专利]一种胎牛血清替代物及其制备方法和应用

摘要

本发明公开了一种胎牛血清替代物及其制备方法和应用，通过在去除蛋白的成牛血清中加入特定的化合物，得到了良好的胎牛血清替代替物。本发明的胎牛血清替代物用于细胞培养时，细胞的生长状态良好，与使用胎牛血清基本一致。胎牛血清替代物具有较好的批间稳定性，不同批次的胎牛血清替代物的培养基对细胞的培养无显著影响。本发明的胎牛血清替代物，生产和使用成本相对较低，价格波动较小。

主权项

1.一种胎牛血清替代物，由去除蛋白的成牛血清和营养组分组成，其特征在于：各营养组分在去除蛋白的成牛血清中的终含量为：CaCl₂·2H₂O154.4 mg/L±2%CuSO₄·5H₂O0.0013 mg/L±2%1% 柠檬酸亚铁2.46 ml/L (0.246% v/v) ±2%氢化可的松0.5 mg/L±2%FeSO₄·7H₂O0.417 mg/L±2%KCl311.8 mg/L±2%MgCl₂·6H₂O61 mg/L±2%MgSO₄·7H₂O99.88 mg/L±2%NaCl6.9 g/L±2%NaH₂PO₄·2H₂O70.68 mg/L±2%Na₂HPO₄·12H₂O71.02 mg/L±2%葡萄糖1.25g/L±2%丙酮酸钠55mg/L±2%GABA储存液2 ml /L±2%LiCl储存液2 ml±2%哌啶酸浓缩液129.7ul /L±2%Stock A储存液20 ml /L±2%Na₂SeO₃ 储存液0.2 ml/L±2%其中，去除蛋白的成牛血清的制备方法如下：1)取健壮成牛血液，加入抗凝剂，静置后无菌条件下取黄色血浆，离心去除沉淀，取上清；2)在步骤1）得到的上清中加入终浓度为20mM的CaCl2，37℃水浴2h；3)将步骤2）水浴后的上清冷冻，之后放置融化，去除蛋白沉淀并收集上清；4)向步骤3）的上清中加入NaCl进行盐析，分离上清，离心去除沉淀，收集上清；5)脱盐，将NaCl质量浓度调到0.7%，得到去除蛋白的成牛血清。