[发明专利]一种长片段DNA体外重排的方法在审
| 申请号： | 201710772171.X | 申请日： | 2017-08-31 |
| 公开（公告）号： | CN107641606A | 公开（公告）日： | 2018-01-30 |
| 发明（设计）人： | 元英进;吴毅;朱瑞莹;马璐;刘瑞 | 申请（专利权）人： | 天津大学 |
| 主分类号： | C12N1/19 | 分类号： | C12N1/19;C12N15/65;C12N15/90;C12R1/865 |
| 代理公司： | 北京集佳知识产权代理有限公司11227 | 代理人： | 刘猛,赵青朵 |
| 地址： | 300073 天津市*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | 本发明涉及生物技术领域，具体公开了一种长片段DNA体外重排的方法。本发明利用改善的Cre‑LoxP系统的特异性重组技术，大大提高了长片段DNA重排的效率，以数量庞大的长片段DNA发生重排的质粒文库为基础，将质粒文库导入到对应的宿主细胞验证其最佳的表型，进而确定重排后的长片段DNA序列，可以广泛应用于基因重排、文库构建和代谢通路优化领域。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 片段 dna 体外 重排 方法 | ||
【主权项】：
一种长片段DNA体外重排的方法，其特征在于，包括：步骤1、在包含有2个以上功能基因的长片段DNA的每个功能基因的5’和3’两端，各插入一段SEQ ID NO:1所示核苷酸序列，获得待重排的长片段DNA；步骤2、将待重排的长片段DNA连接到带有筛选标签的质粒上，获得待重排的质粒；步骤3、将待重排的质粒、Cre酶、Cre酶缓冲液和ddH2O混合开启重排，然后使Cre酶失活关闭重排，获得DNA重排的质粒文库；步骤4、将DNA重排的质粒文库转化到出发菌株并进行培养，以出发菌株为对照，选择菌落较大、颜色和对照菌落成显著差异的菌落作为潜在的优势表型菌落，提取其中的DNA重排的质粒，对质粒上的重排后的长片段DNA进行分析。
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